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PRECAUCIÓN: No sacuda o golpee la cubeta de gel cuando la tapa esté
G. Electroforesis de muestra
PRECAUCIÓN: NO SUPERE LA TENSIÓN MÁXIMA DE
PRECAUCIÓN: Los vapores de formaldehído son tóxicos. La
NOTA:
en su lugar. El interruptor de seguridad se acciona por un
sensor de efecto Hall que depende de un imán
incorporado en la tapa. Al mover la cubeta de gel se
puede mover la tapa y hacer que la unidad haga una
pausa hasta que se vuelva a poner la tapa en su sitio.
La tensión máxima aplicada que se sugiere para la
electroforesis de ADN en geles de agarosa utilizando la
Gel XL es de 150 voltios. En un gel TBE al 1 % esto se
traduce en una duración del ciclo de aproximadamente 1
hora. Se pueden usar tensiones más bajas, sin duda, y
como regla general, un ciclo a 70 voltios tardará dos
veces más que un ciclo a 140 V. Se pueden utilizar
tensiones más elevadas para disminuir el tiempo del
ciclo, pero si la unidad está funcionando a tensiones de
más de 140 V, el calor generado durante la electroforesis
puede disminuir la resolución de la muestra. Dichos
artefactos pueden evitarse teniendo la unidad en marcha
en una sala fría o añadiendo "cubitos de hielo" de tampón
de electroforesis 1X para mantener correctamente
refrigerada la unidad.
FUNCIONAMIENTO DE 150 VOLTIOS.
Los parámetros de ejecución que se sugieren para la
electroforesis del ARN en geles de agarosa que
contienen formaldehído son de 60 a 80 voltios.
electroforesis de ARN en geles que contengan
formaldehído debe realizarse dentro de una campana de
vapores.
Siga la migración de la muestra en el gel utilizando el
colorante de carga como indicador. (Véase la fórmula de
tampón de carga de muestras en el Apéndice A.) Permita
que las muestras migren hasta que los fragmentos se
hayan separado, normalmente hasta que el frente de tinte
azul de bromofenol haya migrado hasta 3/4 del gel.
Si el gel contiene bromuro de etidio, el progreso de la
electroforesis se puede controlar durante el ciclo
desconectando el suministro de alimentación, retirando la
tapa e iluminando con una luz ultravioleta de onda media
en el gel. Las bandas resueltas aparecerán como bandas
naranjas sobre un fondo de color morado oscuro.
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