Para Uso Diagnóstico In Vitro 8.3.2 Hibridación - Greiner Bio-One PapilloCheck Manual De Instrucciones

8.3.2 Hibridación
La hibridación se debe realizar a temperatura ambiente (20-25 °C). Los pasos de trabajo del
principio para hibridar los productos de PCR de la reacción PCR PapilloCheck
PapilloCheck se muestran en la figura 5.
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Mezcle los productos de la PCR antes de usarlos. Centrifúguelo brevemente.
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Si los productos de la PCR se almacenaron a -20 °C hasta la hibridación, primero descongélelos
antes de mezclarlos y después continúe según lo descrito.
Mezcle el tampón de hibridación en el Vortex antes de usarlo. Centrifúguelo brevemente.
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Mezcle 30 µl del tampón de hibridación PapilloCheck
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PCR con 8 tubos con 5 µl del producto de la PCR mezclándolo con un Vortex, o bien pipeteándolo
arriba y abajo varias veces.
Centrifúguelo brevemente.
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Transfiera 25 µl de la mezcla de hibridación a cada pocillo del microchip usando los seis canales
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de una multipipeta. Evite la formación de burbujas de aire.
Se recomienda procesar seis muestras en paralelo usando una multipipeta de 8 canales y bandas
PCR con 8 tubos (consulte la figura 5). Esto aumenta la eficiencia y velocidad de la manipulación, lo
que reduce el riesgo de evaporación. Si se va a procesar más de un portaobjetos al mismo tiempo,
es obligatorio usar una multipipeta para lograr el tiempo correcto de hibridación.
Si es posible, hibride los 12 pocillos del microchip. Si va a procesar menos de 12 muestras, deje
vacíos los pocillos sin usar. Los pocillos sin usar de un microchip procesado no se pueden usar para
muestras futuras.
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Manipule el microchip con cuidado para no derramar la mezcla de hibridación. Los derrames pueden
ocasionar la contaminación cruzada de muestras y resultados falsamente positivos.
Incube el microchip durante exactamente 15 minutos a temperatura ambiente (20-25 °C) dentro
de la cámara de hibridación preparada en una atmósfera oscura y saturada de humedad. Tenga
cuidado de no mover la cámara de hibridación durante el proceso.
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No cambie nunca el tiempo ni la temperatura de incubación de la reacción de hibridación, ya que podría
causar una pérdida de intensidad en la señal fluorescente o un aumento de la fluorescencia no específica.
No deje que los microchips hibridados entren en contacto directo con la luz del sol.
PapilloCheck - Manual de instrucciones
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Revisión: BQ-013-07 / Agosto de 2011
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en un microtubo nuevo de una banda
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en el microchip
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