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8.2.1
Preparación del termociclador
El equipo de ensayo PapilloCheck
• GeneAmp
PCR system 9700 (Applied Biosystems)
®
• Veriti™ 96-Well Thermal Cycler (Applied Biosystems)
• peqSTAR 96X Universal (PEQLAB Biotechnologies GmbH).
!
Es absolutamente necesario usar uno de los termocicladores mencionados anteriormente para lograr el
rendimiento previsto.
El programa del termociclador de la PCR PapilloCheck
Tabla 3: Programa del termociclador para la PCR PapilloCheck
Tiempo
Temp. °C
20 min
37 °C
15 min
95 °C
30 s
95 °C
25 s
55 °C
45 s
72 °C
30 s
95 °C
45 s
72 °C
Espera
10 °C
Además, se deben establecer los siguientes parámetros de ejecución en cada termociclador. Para
obtener una descripción de cómo establecer estos parámetros, consulte el manual de instrucciones
del termociclador en cuestión.
GeneAmp
PCR system 9700 (Applied Biosystems)
®
Establezca el volumen de reacción en 26 µl, la velocidad de incremento en "9600" y use la temperatura
de tapa 103 °C.
Veriti™ 96-Well Thermal Cycler (Applied Biosystems)
Use la herramienta de conversión de método (Convert Method) del Veriti™ 96-Well Thermal Cycler
para introducir el programa de PCR PapilloCheck
Establezca el volumen de reacción en 26 µl y la temperatura de tapa en 103 °C.
peqSTAR 96X Universal (PEQLAB Biotechnologies GmbH)
Use el programa PCR preprogramado PapilloCheck
el termociclador. Por lo general, esta es la ruta con la que se puede abrir el programa: local/Scripts/
GreinerBioOne/PapilloCheck.js.
8.2.2
Tratamiento de uracil-N-glucosilasa (UNG)
La PCR PapilloCheck
®
la PCR PapilloCheck
, lo que convierte los productos de la PCR en susceptibles a la degradación
®
mediante UNG. La UNG divide el producto de la PCR en los sitios donde se ha incorporado un residuo
de desoxiuridilato. Los productos de la PCR divididos no se amplificarán en una reacción subsiguiente.
Por tanto, se puede utilizar un tratamiento de UNG para eliminar la contaminación cruzada de
reacciones PCR anteriores
La adquisición de PapilloCheck
11
5.683.896, 5.945.313, 6.287.823 y 6.518.026 y las patentes correspondientes en otros países.
Manual de instrucciones de PapilloCheck
Revisión: BQ-708-00 / Octubre de 2017
se ha validado con los siguientes termocicladores:
®
N.º de ciclos
1
1
40
15
∞
contiene dUTP, que se incorpora a los productos de la amplificación durante
.
11
va acompañada de una licencia limitada bajo los números de patente de EE. UU. 5.035.996,
®
y PapilloCheck
high-risk
®
®
se resume en la Tabla 3.
®
®
y seleccione el modo "9600 Emulation Mode".
®
"PapilloCheck.js", que se suministra junto con
®
24
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