Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 84

POSTUP
Úplné pokyny k automatické analýze jsou uvedeny v příručce stemCXP System Guide (Pokyny k systému
stemCXP), dodávané se systémovým softwarem stemCXP.
Při ruční analýze postupujte podle příbalového letáku k balíku Stem-Kit Reagents a dodržujte následující postup.
Kvůli standardizaci analýzy při obdržení nové soupravy Stem-Kit Reagents a poté jednou
POZNÁMKA:
denně spusťte proces kontroly obarvením buněk Stem-Trol Control Cells se vzorkem
normální periferní krve od zdravého dárce. Jelikož jsou buňky Stem-Trol Control Cells
stabilizované (tj. buňky bez životnosti), platí dále, že obarvení barvivem pro určení
životnosti buněk 7-AAD lze u buněk Stem-Trol Control Cells zkontrolovat vizuálně
(informace jsou uvedeny v části týkající se vytváření histogramů).
Ujistěte se, že průtokový cytometr je řádně seřízen a standardizován pro měření intenzity fluorescence podle
doporučení výrobce přístroje a laboratorních směrnic. Ověřte, že jsou nastavení kompenzace fluorescence řádně
upravena podle pokynů výrobce a laboratorních směrnic.
Nechte kontrolní reagencii a protilátky nabýt pokojové teploty.
Pro každý experiment označte jednu zkumavku: TROL 45/34/7-AAD.
1. Pipetou do zkumavky přeneste 20 µl CD45-FITC / CD34-PE.
2. Do zkumavky přeneste pipetou 20 µl barviva pro určení životnosti buněk 7-AAD.
DŮLEŽITÉ:
3. Na dno zkumavky pipetou přesně přeneste 100 µl dobře promíchaného vzorku normální plné krve s použitím
kalibrované pipety s pozitivním nesprávným umístěním nebo opakovací pipety.
4. Připravte a přidejte přípravek Stem-Trol:
• Míchejte buňky Stem-Trol Control Cells po dobu 5 sekund.
• Do zkumavky pipetou přesně přeneste 20 µl buněk Stem-Trol Control Cells.
• Zkumavky míchejte po dobu 5 sekund.
5. Inkubujte 20 minut při laboratorní teplotě (18–25 °C) bez přístupu světla.
6. Přidejte do zkumavky 2 ml připraveného lyzačního roztoku 1X NH
dobu 5 sekund.
Podrobnosti týkající se přípravy lyzačního roztoku naleznete v příbalovém letáku k balíku Stem-Kit Reagents.
7. Inkubujte 10 minut při pokojové teplotě bez přístupu světla.
8. Zkumavky skladujte ve stojánku na ledu (2–8 °C) a bez přístupu světla.
DŮLEŽITÉ:
9. Přípravek Stem-Count nebo Flow-Count Fluorospheres před použitím lehce promíchejte překlopením lahvičky
3krát až 5krát. Zabraňte nadměrnému míchání, aby nedocházelo ke vzniku vzduchových bublin.
10.Před získáváním přeneste pipetou do zkumavky 100 µl přípravku Stem-Count nebo Flow-Count
Fluorospheres.
11. Po každém přidání ihned míchejte po dobu 5 sekund. Skladujte při teplotě 2–8 °C. Opakujte míchání přímo
před získáváním průtokovou cytometrií.
DŮLEŽITÉ:
B60231–AE
Hrozí riziko neúplné lýzy, pokud vzorek krve zůstane ve zkumavce na horní nebo boční
straně. Při pipetování postupujte opatrně, aby nedošlo ke kontaktu krve s horní nebo
boční stranou zkumavky. V případě potřeby zkumavku vyčistěte bavlněným tampónem
a odstraňte z horní a boční strany zkumavky veškeré stopy vzorku krve.
V případě pipetování vzduchových bublin hrozí riziko chybných výsledků. Při
nadměrném míchání přípravku Stem-Count nebo Flow-Count Fluorospheres může
docházet ke vzniku vzduchových bublin. Neprovádějte nadměrné míchání přípravku
Stem-Count nebo Flow-Count Fluorospheres a nepipetujte do zkumavek na vzorky
vzduchové bubliny.
Hrozí riziko výskytu chybných výsledků, je-li vzorek analyzován později než 1 hodinu
po přidání přípravku Stem-Count nebo Flow-Count Fluorospheres. Připravené vzorky
je třeba analyzovat do 1 hodiny od přidání přípravku Stem-Count nebo Flow-Count
Fluorospheres.
Cl Lysing Solution a ihned jej míchejte po
4
84 of 128