Beckman Coulter IM3632 Manual De Instrucciones página 93

3. Histogram 2 – Histogram 2 üzerinde düşük ila ara Yan Saçılmaya sahip tüm CD34
bir B Bölgesi oluşturun. Histogram 2'de 75.000 olaylık (CD45
4. Histogram 3 – Histogram 3 üzerinde kümelenmiş tüm CD45
5. Histogram 4 – Histogram 4 üzerinde ara yan saçılma ve ara ila yüksek ileri saçılma ile tüm kümelenmiş olayları
içerecek şekilsiz bir D Bölgesi oluşturun.
6. Histogram 5 – Histogram 5 üzerinde CD34
bir Quadstat I Bölgesi oluşturun.
7. Histogram 5 – Histogram 5 üzerinde ikililer dahil tüm Stem-Count veya Flow-Count Fluorospheres'i çevreleyen
şekilsiz bir H Bölgesi oluşturun. H bölgesi, Histogram 5'in sağ üst köşesine konumlandırılmalıdır.
NOT:
8. Histogram 6 – D Bölgesini Histogram 4'ten F Bölgesi olarak Histogram 6'ya kopyalayın.
9. Histogram 7 – Histogram 7 üzerinde yalnızca Stem-Count veya Flow-Count Fluorospheres singletlerini içeren
doğrusal bir G Bölgesi oluşturun. G Bölgesi, CD34
vermek üzere "CAL" olarak etiketlenebilir (daha fazla bilgi için cihaz kılavuzuna bakın).
10.Histogram 8 – Histogram 8 üzerinde uygulanabilir lökositleri (7- AAD negatif olayları) uygulanamaz olaylardan
(başta 7-AAD boyama için pozitif Stem-Trol Control Cells) ayırmak için doğrusal bir J Bölgesi oluşturun.
Kapı Oluşturma
Kapıları aşağıdaki şekilde oluşturun:
1. Histogram 1 – Histogram 1'e tüm Stem-Count veya Flow-Count Fluorospheres dışındaki bütün olayları
görüntülemek üzere "H" atayın. "not gates" oluşturma için cihaz kılavuzuna bakın. "
2. Histogram 2 – Tüm CD45
3. Histogram 3 – Tüm CD45
4. Histogram 4 – Düşük ila ara yan saçılma ve düşük CD45 boyama ekspresyonuna sahip tüm CD45
kümelenmiş olaylarını görüntülemek için Histogram 4'e "A" ve "B" ve "C" (ABC) atayın. ABCD Bölgesindeki
olaylar gerçek CD34
5. Histogram 5 – Tüm olayları göstermek üzere geçitsizdir.
6. Histogram 6 – Ayrıştırıcı üzerinde görsel bir kontrol olarak lenfositleri görüntülemek için "E" atayın.
7. Histogram 7 – Histogram 7'ye ikililer dahil tüm Stem-Count veya Flow-Count Fluorospheres'i göstermek üzere
"H" atayın.
8. Histogram 8 – Histogram 8'e CD45
Akış Sitometresi Ayarı
1. Üretici ve laboratuvar kılavuzlarına uygun olarak akış sitometresinin doğru şekilde hizalandığından ve ışık
saçılması ve floresan yoğunluğu için standart hale getirildiğinden emin olun. Standart çalışma için renk
dengelemesinin ayarlandığını doğrulayın. Daha fazla talimat için cihazın kılavuzuna bakın.
2. Test tüplerini 5 saniye boyunca vorteksleyin.
3. Akış sitometresi üzerinde veri edinme gerçekleştirin. En az 75.000 CD45
4. TROL 45/34/7-AAD tüpünü analiz ederek ayrıştırıcıyı ve bölgeleri ayarlayın.
Analiz Örneği
EK'te gösterilen histogramlar protokolde gösterildikleri gibi artan sayı sırasıyla görüntülenir.
CD34 Stem-Trol Control Cells hesaplaması
+
Stem-Count veya Flow-Count Fluorospheres ile otomatik olarak ayarlanan akış sitometri sonuçları kullanılarak,
Assayed Concentration (Test Edilen Konsantrasyon) System II Yazılımı (Sürüm 3.0) ve bir COULTER EPICS
XL/XLMCL akış sitometresi ile elde edilmiştir.
COULTER EPICS XL / XL-MCL akış sitometrelerinde otomatik olarak hesaplanmış mutlak sayım belirlemelerini
almak için örnek edinme öncesinde doğru Stem-Count veya Flow-Count Fluorospheres Test Edilen
Konsantrasyonu girilmelidir.
B60231–AE
H Bölgesinin ŞEKİLSİZ bir bölge olarak çizildiğinden emin olun.
olaylarını görüntülemek için Histogram 2'ye "A" atayın.
+
CD34 olaylarını görüntülemek için Histogram 3'e "A" ve "B" (AB) atayın.
+ +
HPC'dir.
+
olaylarını göstermek üzere "A" atayın.
+
olayları) bir durdurma sayısı ayarlayın.
+
olaylarını içeren şekilsiz bir C Bölgesi oluşturun.
dim
olaylarındaki CD45 ekspresyonunun alt limitini doğrulamak üzere
+
HPC mutlak sayılarının otomatik hesaplanmasına izin
+
93 of 128
olaylarını içeren doğrusal
+
olayı analiz edilmelidir.
+
CD34
+ +