Directrices Para Un Análisis De Hrm Óptimo - Qiagen Rotor-Gene Q MDx Manual Del Usuario

B
metilado
Análisis de metilación cuantitativo por HRM. Se analizaron y clasificaron varios ratios de ADN-APC (adenomatosis polyposis
coli) metilados y no metilados mediante el análisis de metilación de HRM en el Rotor-Gene Q con el EpiTect HRM Kit. El gráfico
muestra A, una curva de disociación estándar normalizada, y B, un gráfico de diferencias normalizado al 50 % de muestra
metilada.
10.5 Directrices para un análisis de HRM óptimo
El éxito del análisis de HRM depende enormemente de la secuencia concreta que se esté
analizando. Algunos motivos de secuencia, como bucles de horquilla u otras estructuras
secundarias, regiones localizadas de contenido GC inusualmente alto o bajo, o secuencias de
repetición pueden afectar al resultado. Además, el uso de kits estandarizados y protocolos
optimizados de QIAGEN puede ayudarle a evitar muchos de los posibles problemas que podrían
surgir. A continuación, se detallan algunas directrices sencillas para garantizar un resultado
óptimo.
Analice fragmentos de ADN pequeños
Analice fragmentos inferiores a 250 bp. Aunque es posible analizar productos de mayor tamaño,
la resolución obtenida será inferior. Esto se debe a que, por ejemplo, una variación de base única
tiene un mayor efecto en el comportamiento de disociación de un amplicón de 100 bp que en un
amplicón de 500 bp.
Manual del usuario de Rotor-Gene Q MDx CE 02/2022 180