Qiagen Rotor-Gene Q MDx Manual Del Usuario página 187

8. Defina las condiciones de la serie de HRM. Modifique las condiciones para que coincidan con
el amplicón. En el primer conjunto de experimentos, permita un dominio de disociación amplio.
Utilice el T teórico como nivel orientativo para un rango adecuado. Una vez que haya
m
determinado el punto en el que se disociará el producto, reduzca el dominio de disociación a
un intervalo de, como máximo 10 °C. Asegúrese de que el inicio de la disociación ocurra 5 °C
antes de la primera transición de disociación. La rampa predeterminada estará definida a
0,1 °C, con una retención de 2 segundos en cada paso. La transición de rampa mínima es de
0,05 °C con una retención de 1 segundo en cada paso. Los datos se adquieren
automáticamente en el canal de HRM. La optimización de ganancia automática se lleva a cabo
de manera predeterminada. El software buscará el ajuste de ganancia óptima para que el
valor de fluorescencia más elevado detectado no esté por encima de 70 unidades en una
escala de 100. Tenga en cuenta que esta cifra puede definirse en un máximo de 100.
9. Opcional: defina la optimización de ganancia automática. Esto se aplica solo al paso de
amplificación en tiempo real y se define para el canal verde. Haga clic en el botón Optimize
Acquiring (Optimizar adquisición) para optimizar solo los canales que utilice la serie. El mejor
momento para llevar a cabo la optimización es justo antes del primer paso de adquisición, por
lo que deberá marcar la casilla de verificación Perform Optimization Before First
Acquisition(Llevar a cabo optimización antes de la primera adquisición). El rango de
fluorescencia de fondo recomendado para el intercalado de colorantes se encuentra entre 1 y
3 unidades de fluorescencia. Para modificar este ajuste, haga clic en el nombre del canal para
seleccionarlo de la lista y, después, en el botón Edit (Editar).
Manual del usuario de Rotor-Gene Q MDx CE 02/2022 187