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Preparación de la solución de colorante de rodamina WT
Deberá utilizarse la solución de colorante de rodamina WT al completar una calibración a 2 puntos. Compre rodamina
WT como una solución al 2,5% para seguir el procedimiento a continuación. Kingscote Chemicals (Miamisburg, OH,
1-800-394-0678) ha tenido históricamente una solución del 2,5% (artículo # 106023) que funciona bien con este
procedimiento. Hay que tener en cuenta que hay muchos tipos de rodamina; procure que la rodamina WT esté
seleccionada. Si no puede obtener comercialmente una solución al 2,5%, prepárela a partir de un sólido o de otra
concentración de una solución líquida a una concentración final del 2,5%, o ajuste las diluciones a continuación según
corresponda. Deberá guardarse en el refrigerador cuando no esté en uso.
Para calibraciones de PC y canal de clorofila, hay que preparar una solución de 0,625 mg/L de rodamina WT. Para la
calibración del canal de PE, hay que preparar una solución de rodamina WT de 0,025 mg/L. Los pasos a continuación
describen un procedimiento para preparar estas soluciones.
1. Para cualquier calibración del sensor TAL, hay que preparar una solución de 125 mg/L de rodamina WT.
Transfiera 5,0 mL de la solución de rodamina WT al 2,5% a un matraz aforado de 1000 mL. Llenar el matraz
hasta la marca volumétrica con agua des-ionizada o destilada y mezclar bien para producir una solución con
unos 125 mg/L de rodamina WT. Transfiera a una botella de almacenamiento y consérvela para su uso en el
futuro.
* Esta solución podrá guardarse en el refrigerador (4° C). Su degradación dependerá de la exposición
a la luz y los ciclos de calentamiento repetidos, pero las soluciones utilizadas 1-2 veces al año podrán
guardarse hasta dos años. Los usuarios deberán implementar sus propios procedimientos para
protegerse contra la degradación.
2. Para calibraciones de PC y canal de clorofila, prepare una solución de 0,625 mg/L de rodamina WT. Transfiera
5,0 mL de la solución de 125 mg/L preparada en el paso 1 a un matraz aforado de 1000 mL. Llene el matraz
hasta la marca volumétrica con agua des-ionizada o destilada. Mézclelo bien hasta conseguir una solución
que sea de 0,625 mg/L de rodamina WT. Use esta solución durante las primeras 24 horas de la preparación y
deséchela después de usarla.
3. Para la calibración del canal de PE, prepare una solución de rodamina WT de 0,025 mg/L. Transfiera 0,2 mL de la
solución de 125 mg/L preparada en el paso 1 a un matraz aforado de 1000 mL. Llene el matraz hasta la marca
volumétrica con agua des-ionizada o destilada. Mézclelo bien hasta conseguir una solución que sea de 0,025
mg/L de rodamina WT. Use esta solución durante las primeras 24 horas de la preparación y deséchela después
de usarla.
Además de preparar la(s) solución(es) de rodamina, también es necesario definir los valores de calibración
compensados por temperatura para las soluciones. En general, la fluorescencia está inversamente relacionada
con la temperatura. Mida la temperatura de la(s) solución(es) de rodamina y utilice la temperatura de la solución
en el momento de la calibración para seleccionar las concentraciones de solución compensada, ya sea en RFU
(recomendado) o en µg/L de equivalentes de pigmento, de la siguiente tabla.
Como ejemplo, suponga que vamos a calibrar el canal de clorofila en RFU y que la temperatura medida en la solución
de rodamina WT de 0,625 mg/L es de 22° C. El primer valor estándar ingresado será 0, y el segundo será 16,4
tabla en la página
41). Del mismo modo, si se pretende utilizar la unidad µg/L predeterminada al calibrar la clorofila,
el segundo valor estándar sería 66 en este ejemplo. El uso de la misma solución de rodamina WT de 0,625 mg/L para
calibrar el canal de PC producirá un segundo valor estándar de 16,0 RFU o 16 µg/L. Estos valores se ingresarán al
realizar una calibración a 2 puntos.
40
(ver
Calibración
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