Microscopía De Campo Oscuro De Alto Aumento - Optika B-380 Serie Manual De Instrucciones

Se debe tener cuidado al preparar las muestras para la microscopía de campo oscuro, ya que las características
que se encuentran por encima y por debajo del plano de enfoque también pueden dispersar la luz y contribuir
a la degradación de la imagen.
El espesor del espécimen y el espesor del portaobjetos del microscopio también son muy importantes y, en
general, es deseable una muestra delgada para eliminar la posibilidad de artefactos de difracción que puedan
interferir con la formación de imágenes.
11.3 Microscopía de campo oscuro de alto aumento
Para un trabajo más preciso y fondos más negros, puede elegir un condensador diseñado especialmente para
darkfield, es decir, para transmitir sólo los rayos oblicuos. Existen varias variedades: Condensadores de campo
oscuro "seco" con aire entre la parte superior del condensador y la parte inferior del portaobjetos, y condensa-
dores de campo oscuro de inmersión que requieren el uso de una gota de aceite de inmersión (algunos están
diseñados para utilizar agua en su lugar), estableciendo contacto entre la parte superior del condensador y
la parte inferior del portamuestras. El condensador de campo oscuro de inmersión tiene superficies internas
espejadas y pasa rayos de gran oblicuidad y libre de aberraciones cromáticas, produciendo los mejores resul-
tados y el fondo más negro.
Quizás el condensador de campo oscuro más utilizado es el paraboloide, que consiste en una pieza sólida de
vidrio rectificado con gran precisión en la forma de un paraboloide.
Como se discutió anteriormente, el condensador de campo oscuro seco es útil para objetivos con aperturas
numéricas por debajo de 0.75, mientras que los condensadores de inmersión paraboloide y cardioide (Fig. 23)
pueden ser usados con objetivos de apertura numérica muy alta (hasta 1.4). Los objetivos con una apertura
numérica superior a 1.2 requerirán una cierta reducción de su apertura de trabajo, ya que su apertura numérica
máxima puede exceder la apertura numérica del condensador, permitiendo así que la luz directa entre en el
objetivo. Por esta razón, muchos objetivos de alta apertura numérica diseñados para su uso con iluminación de
campo oscuro y de campo claro se realizan con un diafragma de iris ajustable incorporado que actúa como un
tope de apertura.
Esta reducción en la apertura numérica también limita el poder de resolución del objetivo así como la intensidad
de la luz en la imagen. Los objetivos especializados diseñados exclusivamente para el trabajo en campo oscuro
se producen con una apertura numérica máxima cercana al límite inferior de la apertura numérica del conden-
sador de campo oscuro. No tienen diafragmas internos de iris, sin embargo, los diámetros de la montura de la
lente se ajustan de manera que al menos una lente interna tenga el diámetro óptimo para que funcione como
un tope de apertura.
El condensador cardioide es muy sensible a la alineación y debe colocarse cuidadosamente para aprovechar el
cono muy afilado de la iluminación, lo que lo convierte en el condensador de campo oscuro más difícil de usar.
Además, el condensador produce una cantidad significativa de resplandor, incluso a partir de las partículas de
polvo más diminutas, y la corta distancia focal puede resultar en una mala iluminación de objetos que superen
unas pocas micras de tamaño o grosor. Al elegir portaobjetos para la microscopía cuantitativa de campo oscuro
de alto aumento, asegúrese de seleccionar portaobjetos hechos de una mezcla de vidrio que esté libre de im-
purezas fluorescentes.
Se debe prestar especial atención a los detalles de engrasar un condensador de alta apertura numérica en el
fondo del portamuestras. Es muy difícil evitar la introducción de pequeñas burbujas de aire en el área entre la
lente superior del condensador y el fondo del portaobjetos del microscopio, y esta técnica debe practicarse a la
perfección. Las burbujas de aire causarán destello y distorsión de la imagen, lo que provocará una pérdida de
contraste y una degradación general de la imagen.
También se encuentran problemas cuando se utilizan portaobjetos demasiado gruesos o demasiado delgados.
Muchos condensadores de campo oscuro contienen la gama de espesores de diapositivas utilizables inscritos
directamente en el soporte del condensador. Si el portaobjetos es demasiado grueso, a menudo es difícil en-
focar el condensador sin recurrir a un aceite de inmersión de mayor viscosidad. Por otro lado, los portaobjetos
demasiado delgados tienden a romper la unión de aceite entre el condensador y el portaobjetos. Es una buena
idea comprar portaobjetos de precisión del grosor correcto para evitar cualquiera de los problemas menciona-
dos anteriormente.
Los condensadores de alta apertura numérica, ya sea para uso en seco o con aceite, deben estar centrados con
precisión en la trayectoria óptica del microscopio para lograr un rendimiento óptimo.
Para lograr esto, muchos condensadores de campo oscuro se construyen con un pequeño círculo grabado en la
superficie superior para ayudar a centrar el condensador. El centrado se realiza con un objetivo de baja potencia
(10x-20x) mediante imágenes del círculo grabado y utilizando los tornillos de centrado del condensador para
asegurar que el círculo (y el condensador) estén correctamente centrados en la trayectoria óptica.
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