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Colocar de nuevo la preparación (sin sujetar aún con las pinzas), volver a
apretar el botón verde para que el objetivo suba de nuevo hasta contactar
con el cubreobjetos y enfocar la preparación.
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Poner las pinzas suavemente para fijar la preparación y volver a enfocar
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En caso de querer localizar con óptica de aceite una zona visualizada
previamente con óptica de seco, hay un adaptador para portaobjetos que
lo permite. Consulta con el personal del Servicio si deseas utilizarlo.
2. Visualización de la muestra con luz transmitida
Con el microscopio en modo BI, abrir el shutter de luz transmitida (botón TSHT del
panel de control), encender previamente la lámpara (balda superior) y regular la
intensidad con el potenciómetro. Realizar un ajuste de iluminación de Köhler con el
objetivo a utilizar. Si se desea ver en modo Nomarski, poner el prisma DICT en el panel
de control, introducir el polarizador en el condensador e introducir el analizador que se
encuentra debajo del revolver de objetivos.
Nota 1: Si se utiliza el diodo láser, no se puede poner el polarizador, ya que se estropea.
Nota 2: El analizador interfiere en la captura de imágenes confocales, disminuyendo
ligeramente la fluorescencia que llega al detector.
3. Visualización mediante fluorescencia convencional
Con el microscopio en modo BI, abrir el shutter de luz reflejada o de fluorescencia
(botón RSHT del panel de control), encender previamente la lámpara de fluorescencia y
dejar que se caliente. Poner el filtro adecuado para visualizar el fluorocromo a estudio
en el panel de control. Si queremos quemar menos la muestra, se puede intercalar un
filtro que limita la intensidad de excitación un 25% (está junto a la lámpara de
mercurio)
4. Cambio a modo de visualización y captura de imágenes confocales
Apretando el boton de BI o LSM del frontal del microscopio o del software, o bien se
pasa directamente a modo confocal al comenzar a visualizar una imagen mediante el
botón Focus del software Fluoview
D) Adquisición de imágenes en modo confocal
Debido a la extensión de este apartado, únicamente se van a enumerar las
principales consideraciones a tener en cuenta en la captura de imágenes confocales.
Aconsejamos la lectura del manual del software Fluoview (disponible en pdf y del que
hay una copia impresa en el Servicio a vuestra disposición).
La aplicación de software Fluoview es intuitiva y de fácil manejo. El interfaz de
usuario está diseñado mediante un sistema de paneles compuesto por dos partes
principales: (1) menú de control con un sistema de pestañas con las distintas opciones
de captura y procesamiento (que ocupa el 20% de la pantalla) y (2) visualización de la
imagen (80% de la pantalla). Posee un menú de Ayuda que sugiere la ruta óptica y el
juego de filtros más apropiado para la unidad de escaneo y para el microscopio.
Olympus tiene una web con un simulador de manejo del software de adquisición del
microscopio confocal FV1000. Es muy útil para practicar.
http://www.olympusfluoview.com/java/confocalsimulator/index.html
web:
http://www.ehu.es/SGIker
e-mail:
sgmicromed@ehu.es
Tel. 946015793
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