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helena BioSciences SAS-3 Immunofix Instrucciones De Uso

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Instructions For Use
SAS-3 Immunofix
Cat. No. 300300
SAS-3 Immunofix
Fiche technique
Réf. 300300
SAS-3 Immunofixation
Anleitung
Kat. Nr. 300300
IFE Immunofissazione
Istruzioni per l'uso
Cod. 300300
IFE Inmunofijación
Instrucciones de uso
N o de catàlogo 300300
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Resumen de contenidos para helena BioSciences SAS-3 Immunofix

  • Página 1 BioSciences Europe www.helena-biosciences.com Instructions For Use SAS-3 Immunofix Cat. No. 300300 SAS-3 Immunofix Fiche technique Réf. 300300 SAS-3 Immunofixation Anleitung Kat. Nr. 300300 IFE Immunofissazione Istruzioni per l’uso Cod. 300300 IFE Inmunofijación Instrucciones de uso N o de catàlogo 300300...

  • Página 3: Intended Purpose

    SAS-3 IMMUNOFIX INTENDED PURPOSE The SAS-3 IFE kit is intended for the separation and identification of monoclonal gammopathies by agarose gel electrophoresis. Immunofixation electrophoresis (IFE) is a two stage procedure using high resolution agarose electrophoresis in the first stage, and immunoprecipitation in the second phase.
  • Página 4 3. Destain Solution Dilute the contents of a bottle of Destain A to 2 litres of purified water. Then add the contents of a bottle of Destain B and add a further 3 litres of purified water, slowly. 4. Wash Additive Solution Contains concentrated Wash Additive Solution.

  • Página 5: Items Required But Not Provided

    SAS-3 IMMUNOFIX ITEMS REQUIRED BUT NOT PROVIDED Cat. No. 310200 Sample Applicator Blades (1 x 10) Cat. No. 310300 Sample Applicator Blades (5 x 10) Cat. No. 210100 Disposable sample cups (100) Cat. No. 3100 REP Prep Saline solution (0.85% NaCl)
  • Página 6 NOTE 1: For Serum immunofixation, 1 sample application is required. For Urine immunofixation, 10 sample applications are required. NOTE 2: Urine and serum samples can be run simultaneously on one gel. However, each individual row must contain one type of sample only (eg. rows 2 and 8 = urine, row 14 = serum). If a combination of serum and urine are to be used on the same gel, ensure that the blades for urine samples go onto the SAS-3 for the first 9 load/applications.

  • Página 7: Interpretation Of Results

    A band can also be seen within a polyclonal background when there is a large polyclonal immunoglobulin presence also. The publication 'Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies' is available from Helena BioSciences on request. Urine Immunofixation: Type of Proteinuria...
  • Página 8 2. Non-Specific Precipitation in All Immunoglobulin Lanes Occasionally a completed IFE plate exhibits a precipitate band in the same position in every pattern across the plate. This may result from: a) IgM monoclonal immunoglobulins IgM monoclonal proteins can adhere to the gel matrix. A band will appear in all 5 antiserum lanes of the gel.

  • Página 9: Performance Characteristics

    QUALITY CONTROL Helena Biosciences IFE Control Kit (Cat. No. 9400) can be used to confirm the presence of monoclonal banding in all antisera lanes. Helena Biosciences Kemtrol Abnormal Serum Control (Cat. No. 7025) can be diluted 1 in 100 and used as a positive control for Urine IFE.
  • Página 10 UTILISATION Le kit SAS-3 IFE est utilisé pour la séparation et l'identification des gammapathies monoclonales par électrophorèse en gel d'agarose. L'immunofixation (IFE) est une procédure en deux étapes utilisant l'électrophorèse haute résolution en gel d'agarose dans en premier temps puis l'immunoprécipitation dans un deuxième temps. C'est en biologie médicale que l'on utilise le plus fréquemment l'IFE pour la détection des gammapathies monoclonales.

  • Página 11: Stockage Et Conservation

    SAS-3 IMMUNOFIX 3. Solution décolorante Diluer le contenu d'un flacon de décolorant A avec deux litres d'eau distillée. Ajouter ensuite le contenu d'un flacon de décolorant B puis, lentement, 3 autres litres d'eau distillée. Solution de lavage Contient solution de lavage concentrée. Diluer chaque bouteille dans 5 litres de solution saline.
  • Página 12 MATERIELS NECESAIRES NON FOURNIS Réf. 310200 Applicateurs échantillons 1 x 10 Réf. 310300 Applicateurs échantillons 5 x 10 Réf. 210100 Cupules échantillons jetables 100 Réf. 3100 REP Prep Solution saline (0.85% NaCl) Les réactifs suivants ne sont pas nécessaires pour la réalisation d'une IFE sérum standard mais peuvent être utilisés pour une investigation plus poussée et pour l'IFE Urinaire: Réf.
  • Página 13 SAS-3 IMMUNOFIX NOTE: Pour l'immunofixation sérique, 1 seule application est nécessaire. Pour l'immunofixation urinaire, 10 applications sont nécessaires. REMARQUE 2: Il est possible d'utiliser simultanément sur le même gel des échantillons d'urine et de sérum. Cependant, chaque rang ne doit contenir qu'un seul type d'échantillon (par ex. rangs 2 et 8 = urine, rang 14 = sérum).
  • Página 14 Un bande peut aussi être détectée dans un bruit de fond polyclonal lorsqu'il y a également augmentation polylconale des immunoglobulines. La publication "Immunofixation for the identification of Monoclonal Gammapathies" est disponible auprès d'Helena BioSciences sur demande. Immunofixation urinaire Bandes observées sur le gel Protéines présentes Urine Normale Fine bande d’albumine...
  • Página 15 SAS-3 IMMUNOFIX caractérise par un "effet de zone" (apparition d'une zone incolore cernée de colorant) Une dilution supérieure de l'échantillon est nécessaire pour optimiser la concentration d'immunoglobuline. 2. Précipitation non spécifique dans toutes les cases. Occasionnellement, une IFE montre une bande précipitant au même niveau dans toutes les cases.
  • Página 16 équivalents. CONTRÔLE QUALITÉ Le kit de contrôle IFE Helena BioSciences IFE (réf. 9400) peut être utilisé pour confirmer la présence de bandes monoclonales dans toutes les cases d'antisérums. Le contrôle Kemtrol sérum anormal Helena Biosciences (réf. 7025) peut être dilué au 1/100 et utilisé...

  • Página 17: Warnhinweise Und Vorsichtsmassnahmen

    SAS-3 IMMUNOFIXATION ANWENDUNGSBEREICH Der SAS-3 IFE Kit dient zur Auftrennung und Identifizierung von monoklonalen Gammopathien durch Agarosegel - Elektrophorese. Immunfixationselektrophorese (IFE) läuft in zwei Phasen ab. Die erste Phase verwendet Agarose- Elektrophorese in hoher Auflösung, gefolgt von Immunpräzipitation in der zweiten Phase. Der größte Anwendungsbedarf für IFE liegt im klinischen Laborbereich, hier vor allem in der Diagnose von monoklonalen Gammopathien.
  • Página 18 INHALT 1. SAS-3 IFE-Gel Enthält Agarose in einem Tris / Barbitalpuffer mit Thiomersal und Natriumazid als Konservierungsmittel. Das Gel ist gebrauchsfertig verpackt. 2. Säures-Violett-Farbstoff Enthält eine konzentrierte Säures-Violett-Farbstoff-Lösung. Den Inhalt der Flasche mit 700ml dest. Wasser verdünnen. Über Nacht rühren und vor dem Gebrauch filtern. Lagerung des Farbstoffs in einer fest verschlossenen Flasche.
  • Página 19 SAS-3 IMMUNOFIXATION 5. Verdünnungsmittel Das Verdünnungsmittel sollte bei 15...30°C gelagert werden und ist bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil. Trübung kann auf den Verfall der Verdünnungsmittel hinweisen. 6. SAS-3 IFE Antiseren Kit Der Antiseren Kit sollte bei 2...6°C gelagert werden und ist bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil.
  • Página 20 SCHRITT-FÜR-SCHRITT METHODE 1. Geben Sie die folgenden Parameter in das Gerät ein. Schritt Dauer(mm:zz) Temp. (°C) Spannung Sonstiges Elektrophorese Probe laden 00:30 Geschwind. 1 Probe auftragen 00:30 Geschwind. 1* Elektrophorese 06:30 Antiseren auftragen 10:00 Kämme eingeben 02:00 Blotter D 05:00 Trocknen 08:00 Standort 2 für SPIFE 3000/SAS-3 benutzen.
  • Página 21 Bestandteil des normalen polyklonalen Hintergrundes wahrgenommen werden kann. Bei starker polyklonaler Immunglobulinkonzentrationen können einzelne pathologische Banden überlagert werden. Im Zweifelsfall ist die Probe in höherer Verdünnung erneut zu analysieren. Die Veröffentlichung 'Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies' ist auf Anfrage bei Helena BioSciences erhältlich. Deutsch...
  • Página 22 Urin-Immunfixation: Typ der Proteinurie Auf dem Gel beobachtete Banden Vorhandene Proteine Normales Urin Kleine Albuminbande Albumin Glomerulär Albumin, Alpha-1, Albumin, Alpha-1 Beta, Gamma Antitrypsin, Transferrin, Gammaglobuline Tubulär Alpha-1, Alpha-2, Beta Retinol bindendes Protein, Beta-2 Mikroglobulin, Alpha-2 Mikroglobulin Überfluss Gamma oder variabel Immunglobuline, freie Leichtketten EINSCHRÄNKUNGEN...
  • Página 23 Die Helena BioSciences IFE-Kontrollkit (Kat. Nr. 9400) kann zur Bestätigung der Anwesenheit monoklonaler Banden in allen Antiserumspuren verwendet werden. Die abnormale Serumkontrolle von Helena Biosciences Kemtrol (Kat. Nr. 7025) kann 1 + 100 verdünnt und für IFE im Urin als Positivkontrolle verwendet werden.
  • Página 24 Umbreit, A. and Wiedemann, G. ‘Determination of Urinary Protein Fractions. A Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations’ Clin. Chim. Acta., 2000; 297 : 163-172. Wiedemann, G. and Umbreit, A. ‘Determination of Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic Methods’, Clin.

  • Página 25: Avvertenze E Precauzioni

    SAS-3 IMMUNOFISSAZIONE PRINCIPIO Il kit SAS-3 Immunofix è stato formulato per la separazione ed identificazione delle gammopatie monoclonali mediante elettroforesi proteica su gel di agarosio. L'immunofissazione (IFE) è una procedura che avviene in 2 passaggi: inizialmente viene eseguita un elettroforesi ad alta risoluzione, successivamente avviene l'immunoprecipitazione.
  • Página 26 3. Soluzione decolorante Diluire il contenuto di una bottiglia di decolorante A con 2 litri di acqua distillata. Poi aggiungere lentamente il contenuto di una bottiglia di decolorante B e altri 3 litri di acqua distillata. 4. Soluzione di lavaggio Contiene soluzione di lavaggio concentrata.
  • Página 27 SAS-3 IMMUNOFISSAZIONE MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNITO Cod. 210200 Applicatori 1 x 10 Cod. 210300 Applicatori 5 x 10 Cod. 210100 Cuvette portacampioni, monouso 100 Cod. 3100 REP Prep Soluzione fisiologica (0.85% NaCl) I seguenti articoli non sono necessari per una IFE SIERO standard, ma possono essere richiesti per ulteriori indagini e per le IFE URINE.
  • Página 28 PROCEDURA 1. Programmare i seguenti parametri nella strumentazione: Passo Tempo (mm:ss) Temp (°C) Voltaggio Altro Elettroforesi Caricamento campione 00:30 Velocità 1 Applicazione campione 00:30 Velocità 1* Elettroforesi 06:30 Applicazione antisieri 10:00 Inserimento pettini 02:00 Blotter D 05:00 Asciugatura 08:00 Utilizzare la posizione 2 per lo SPIFE 3000 o SAS-3. NOTE 1: Per l' immunofissazione del siero, è...

  • Página 29: Interpretazione Dei Risultati

    La proteina patologica viene fissata dall'antisiero corrispondente che viene utilizzato. Dove sono presenti basse concentrazioni di proteine patologiche, le bande possono apparire senza le normali immunoglobuline policlonali. La pubblicazione ‘Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies’ è disponibile dal Helena BioSciences, su richiesta. Italiano...
  • Página 30 IMMUNOFISSAZIONE URINE: Tipo di Proteinuria Bande osservate nel gel Proteine presenti Urina normale Piccola banda di albumina albumina Glomerulare Albumina, alfa-1 albumina, alfa1 antitripsina Beta, gamma transferrina, gammaglobuline Tubulare Alfa1, alfa2, beta Proteina legante il retinolo, beta2-globulina, alfa2 microglobulina Aumento Immunoglobuline gamma variabile catene leggere libere...

  • Página 31: Controllo Qualità

    CONTROLLO QUALITÀ Il kit di controllo IFE di Helena BioSciences (Cod. 9400) può essere utilizzato per confermare la presenza della banda monoclonale per tutte le linee antisiero. Il controllo del siero Kemtrol anomalo Helena Biosciences (Cod. 7025) può essere diluito in un rapporto di 1 a 100 e utilizzato come controllo positivo per IFE per urina.
  • Página 32 10. Cawley, L.P., Minard, B.J, Tourtellotte, W.W., Ma, B.I. and Chelle, C., ‘Immunofixation Electrophoretic Technique Applied to Identification of Proteins in Serum and Cerebrospinal Fluid’, Clin. Chem., 1976; 22 : 1262-1268. 11. Ritchie, R.F and Smith, R. ‘Immunofixation III, Application to the Study of Monoclonal Proteins’, Clin.

  • Página 33: Sas-3 Inmunofijación

    SAS-3 INMUNOFIJACIÓN USO PREVISTO El kit IFE de SAS-3 tiene como objeto la separación e identificación de gammapatías monoclonales por electroforesis con gel de agarosa. La inmunofijación (IFE) es un procedimiento en dos etapas aplicando electroforesis en agarosa de alta resolución en la primera etapa e inmunoprecipitación en la segunda.
  • Página 34 COMPOSICION 1. Gel de IFE SAS-3 Contiene agarosa en un tampón de Tris-Barbital, con Tiomersal y acída de sodio como conservantes. El gel viene envasado listo para usar. 2. Colorante violeta ácido concentrado Contiene colorante violeta ácido concentrado. Diluir el contenido del frasco en 700ml de agua destilada.

  • Página 35: Accesorios Necesarios No Suministrados

    SAS-3 INMUNOFIJACIÓN 5. Solución diluente de muestras El solución diluente de muestras debe guardarse a una temperatura entre 15...30°C y es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. La aparición de turbidez puede ser indicio de deterioro. 6.
  • Página 36 PROCEDIMIENTO PASO A PASO 1. Programar los siguientes parámetros en el instrumento: Paso Tiempo (mm:ss.) Temperatura (°C) Voltaje Otros Electroforesis Cargar muestra 00:30 Velocidad 1 Aplicar muestra 00:30 Velocidad 1* Electroforesis 06:30 Aplicar antisuero 10:00 Insertar peine 02:00 Secante D 05:00 Secar 08:00...

  • Página 37: Interpretacion De Resultados

    También se puede observar una banda dentro de un fondo policlonal cuando también se da una fuerte presencia de inmunoglobulina policlonal. Bajo pedido, Helena Biosciences puede suministrar la publicación 'Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies'.

  • Página 38: Limitaciones

    Inmunofijación de la orina: Tipo de proteinuria Bandas observadas en el gel Proteínas presentes Orina normal Pequeña banda de albúmina Albúmina Glomerular Albúmina, alfa-1, beta, gamma Albúmina, alfa-1, antitripsina, transferina, gammaglobulinas Tubular Alfa-1, alfa-2, beta Proteínas ligadas con retinol, beta2-microglobulina, alfa2-microglobulina Exceso Gamma o variable...

  • Página 39: Caracteristicas Funcionales

    CONTROL DE CALIDAD Puede usarse el Kit de control de IFE de Helena BioSciences (N.º de Cat. 9400) para confirmar la presencia de bandas monoclonales en todas las calles de antisueros. El control de suero anormal Kemtrol de Helena Biosciences (N.º Cat. 7025) puede diluirse en una proporción 1 en 100 y usarse como control positivo para el IFE de Orina.
  • Página 40 Wiedemann, G. and Umbreit, A. ‘Determination of Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic Methods’, Clin. Lab.; 1999, 45 : 257-262. Wong, W.K., Wieringa, G.E., Stec, Z., Russell, J., Cooke, S., Keevil, B.G. and Lockhart, S. ‘A Comparison of Three Procedures for the Detection of Bence-Jones Proteinuria’ Ann. Clin. Biochem., 1997, 34 : 371-374.
  • Página 44 BioSciences Europe www.helena-biosciences.com Helena Biosciences Europe Queensway South Team Valley Trading Estate Gateshead Tyne and Wear NE11 0SD Tel: +44 (0) 191 482 8440 Fax: +44 (0) 191 482 8442 email: info@helena-biosciences.com HL-2-1282P 2007/02 (6)

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