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problema
Muestra teñida recoge:
Resolución de la banda pobre
Bromphenolblau nicht in einer
konzentrierten Zone schärfen dem
Stacking-Gel
•
p16
solución
Cerca de la parte delantera tampón
• La proteína no está suficientemente limitado por el gel de
resolución; aumentar el% T.
Cerca de la parte superior del gel cuando el frente tampón ha
alcanzado la parte inferior
• El tamaño de los poros del gel es demasiado pequeño.
Disminuir la T% del gel de resolución.
• La proteína ha precipitado. Se calienta la muestra a una
temperatura más baja (70 °C o menos) para 1-2 minutos.
• Use sólo los reactivos de alta calidad.
• Realizar la separación en una posición más baja de
corriente o voltaje.
• Dializar o desalar la muestra.
• Reducir el volumen de muestra o de la concentración.
• Utilice sólo la urea recién desionizada.
• Mejorar la disociación de las subunidades de la muestra
de calefacción en tampón de muestra SDS 1-2 minutos a
100 °C.
• Añadir más mercaptoetanol o ditiotreitol, revisar el
tratamiento de la muestra.
• Sólo usar geles que se prepararon recientemente.
• Ver valores de pH de la separación y apilamiento soluciones
de gel. No valorar en retroceso tampones.
Preparación de la muestra
• Muestras de calor para no más de 1-2 minutos a 100 °C.
Almacenar en hielo después del calentamiento.
• Almacenar la muestra en hielo antes de que sea
desnaturalizada.
• Añadir inhibidores de la proteasa, si es necesario para evitar
la degradación proteolítica de la muestra.
• Almacene las muestras que se congeló en alícuotas para
evitar la congelación y descongelación repetida. (Conservar
a -40 °C a -80 °C)
• Vierta un gel más alto de apilamiento. (Para obtener los
mejores resultados, permita una altura de gel de apilamiento
de 2,5 veces la altura de la muestra en el pozo.)
• Deshágase de las soluciones de acrilamida obsoletas y usar
sólo el grado más alto de la acrilamida.
• Al preparar las muestras, evitar el uso de soluciones con
una concentración alta de sodio o potasio.
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