Illumina NovaSeq 6000 Guia Del Usuario página 54

Guía del sistema de secuenciación NovaSeq 6000
Agrupación de bibliotecas normalizadas y adición de control PhiX opcional
1 Combine el volumen adecuado de cada biblioteca normalizada en un tubo de microcentrifugado nuevo
para generar los volúmenes finales adecuados por carril.
Volumen total de grupo por
Modo
SP/S1
S2
S4
Por ejemplo, para un grupo de seis bibliotecas y el modo S4, combine 5 µl de cada biblioteca
normalizada con la misma concentración.
2 [Opcional] Almacene las bibliotecas restantes no agrupadas a una temperatura de entre –25 °C y –15 °C.
3 [Opcional] Enriquezca con 1 % de PhiX no desnaturalizado como se indica a continuación.
a Diluya 10 nM de PhiX a 0,25 nM con 10 mM de Tris-HCl, pH 8,5.
b Añada el volumen adecuado de PhiX al tubo del grupo de bibliotecas no desnaturalizadas.
Modo
SP/S1
S2
S4
Cuando añada el control PhiX, el 1 % es la cantidad recomendada para lograr bibliotecas bien
equilibradas. Es posible que las bibliotecas de baja diversidad necesiten más. Para utilizar un control
PhiX con bibliotecas de baja diversidad, póngase en contacto con el servicio de asistencia técnica de
Illumina para que le orienten.
Preparación de una dilución nueva de NaOH
Prepare una dilución nueva de NaOH a 0,2 N para desnaturalizar las bibliotecas para la secuenciación. Para
minimizar los errores de pipeteo que podrían afectar a la concentración de NaOH final, prepare, al menos,
30 µl de NaOH diluido por celda de flujo. Para un experimento de doble celda de flujo, prepare 60 µl de NaOH
diluido.
PRECAUCIÓN
El NaOH a 0,2 N recién diluido es fundamental para el proceso de desnaturalización. La desnaturalización
inadecuada puede reducir el rendimiento.
1 Para una celda de flujo, combine los siguientes volúmenes en un tubo de microcentrifugado para
diluir NaOH 1 N a 0,2 N.
Agua de laboratorio (24 µl)
u
Preparado de NaOH 1N (6 µl)
u
Estos volúmenes proporcionan un resultado de 30 µl de NaOH a 0,2 N. Para dos celdas, se recomienda
duplicar los volúmenes.
2 Invierta varias veces para agitar o mezcle bien. Mantenga el tubo tapado y utilícelo en un plazo máximo
de 12 horas.
N.º de documento 1000000019358 v11 ESP N.º de material 20023471
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
carril (µl)
18
22
30
PhiX a 0,25 nM no desnaturalizado (µl)
0,7
0,8
1,1
Biblioteca no desnaturalizada (µl)
18
22
30
45