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- Cut 6 pieces of filter paper to dimensions similar to the pads and submerge
them in transfer buffer for 10 min.
- Soak 2 pads in transfer buffer completely removing the bubbles that may con-
tain inside.
- Take one of the transfer cassettes and put it open in an adequate recipient con-
taining 1 or 2 cm of cold transfer buffer.
- Place one pad on the black perforated plate. Note: it is very important to put
all the components of the blot stack in the order indicated in this manual. Proteins
always migrate towards the anode (positive pole) and this order ensures a proper orien-
tation of the membrane and gel.
- Cover the pad with 3 pieces of filter paper one over the next. If the stack is not
under the surface of the transfer buffer, use a Pasteur pipette to saturate the filter paper
thoroughly.
- Place the gel in the centre of the filter paper and wet the surface of the gel with
additional transfer buffer. Make sure that there are no bubbles trapped under the gel.
- Take the blotting membrane at both ends in a "U" shape; lower it onto the gel
making contact first at the centre. Carefully lower one end, then the other, taking care not
to trap bubbles between the membrane and the gel. Wet the surface of the membrane and
using a glass tube smooth the surface of the membrane to force out any small bubble.
Note: once the membrane makes contact with the gel, do not move it. Moving the mem-
brane may cause spurious bands due to a small amount of rapid capillary transfer.
- Place 3 pieces of wetted filter paper on top of the membrane, followed by ano-
ther pad.
- Close the cassette with the latch to hold the entire stack. Take special care not
to move the stack when closing the cassette.
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Instruction manual 53001501
ENGLISH
pad
filter paper
membrane
gel
filter paper
pad
perforated blade plate
Version 1 May-07
4. MODOS DE USO
4.1 Inspección preliminar
Desembale el módulo de transferencia, retire todas las protecciones y asegúrese de que
no presenta ningún daño debido al transporte. De ser así, comuníquelo inmediatamente
a su transportista o suministrador para que pueda hacer las debidas reclamaciones en el
plazo establecido.
Guarde el embalaje, ya que siempre se deben realizar las devoluciones en su embalaje
original con todos los accesorios suministrados.
Compruebe los accesorios que usted debe recibir:
- 1 Soporte para transferencia
- 2 Casetes con placas perforadas
- 4 Almohadillas
- Garantía
- Manual de instrucciones
Solo aceptamos devoluciones de equipos en los 15 días posteriores al envío y siem-
pre que vengan completos en su embalaje original.
4.2 Modo de uso
Nota: el equipo está diseñado exclusivamente para su uso en el laboratorio; la tempe-
ratura ambiente debe ser de 0-40 ºC y la humedad relativa no debe exceder del 80%.
Trabaje siempre en una superficie, plana, lisa y libre de vibraciones.
Preparación del gel para la transferencia
- Prepare previamente 1 L de tampón de transferencia (Tabla 1) y manténgalo frío
a 4 ºC. Nota: variaciones en el pH, la concentración de metanol o la presencia o ausencia
de detergentes pueden mejorar la transferencia y unión a la membrana de determinadas
proteínas.
T
1. Concentración final de los distintos componentes del tampón de transferencia.
ABLA
El pH final debe ser de 8.3.
Componente
Concentración final
Tris base
24.8 M
Glicina
192 mM
Metanol
10% (v/v)
- Después de la electroforesis, transfiera el gel a un recipiente con unos 50 mL de
tampón de transferencia y deje equilibrar durante 15-20 min. Nota: los geles deben estar
perfectamente equilibrados con el tampón de transferencia para eliminar sales y restos de
detergente presentes en el tampón de electroforesis. Si este proceso no se lleva a cabo
correctamente, durante el proceso de transferencia puede generarse un exceso de calor que
hará que los geles de menos del 12% de acrilamida encojan debido al efecto del metanol.
Revisión 1, Mayo-07
Manual de instrucciones 53001501
CASTELLANO
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