Publicidad
Transferencia
Nota: utilice siempre guantes o pinzas limpias para manipular la membrana de trans-
ferencia y el papel de filtro.
- Corte un trozo de membrana de dimensiones ligeramente superiores a las del
gel (1 ó 2 mm por cada lado). Nota: las membranas más comúnmente utilizadas para la
transferencia de proteínas son de nitrocelulosa o PVDF.
- Si la membrana es de PVDF, sumérjala en metanol 100% durante 10 s, a conti-
nuación en agua desionizada durante 5 min y por último en tampón de transferencia
durante 10 min. Si la membrana es de nitrocelulosa, sumérjala directamente en tampón de
transferencia. En cualquier caso, la membrana debe estar perfectamente impregnada de
tampón de transferencia; no debe presentar puntos secos.
- Corte 6 trozos de papel de filtro de dimensiones similares a las de las almoha-
dillas y sumérjalos en tampón de transferencia durante 10 min.
- Empape 2 almohadillas en tampón de transferencia eliminando completamen-
te las burbujas que puedan contener en su interior.
- Coja uno de los casetes para transferencia y colóquelo abierto en un recipiente
adecuado que contenga tampón de transferencia hasta una altura de 1-2 cm.
- Coloque una almohadilla sobre la placa perforada de color negro Nota: es de
suma importancia que el montaje se realice en el orden indicado en este manual. Las pro-
teínas migrarán siempre hacia el ánodo (polo positivo) y de este modo, se asegura que el
gel y la membrana estén perfectamente orientados.
- Cubra la almohadilla con 3 trozos de papel de filtro colocados uno encima del
otro. Si el montaje no está sumergido en el tampón de transferencia, utilice una pipeta
Pasteur para empapar bien el papel de filtro.
- Coloque el gel sobre el papel de filtro en una posición lo más centrada posible.
Humedezca la superficie del gel con solución de transferencia y asegúrese de que no han
quedado burbujas atrapadas bajo el gel.
- Coja la membrana de transferencia por ambos extremos de manera que quede
en forma de "U". Colóquela sobre el gel, haciendo contacto en primer lugar con la parte
central. Cuidadosamente baje un extremo y a continuación el otro poniendo gran cuida-
do de que no queden burbujas atrapadas entre la membrana y el gel. Humedezca la super-
ficie de la membrana y utilice un tubo de vidrio para alisar suavemente la superficie de la
membrana y retirar posibles burbujas atrapadas. Nota: una vez la membrana ha entrado
en contacto con el gel, no debe ser movida. Si se mueve puede producir como resultado
bandas falsas debidas a la rápida transferencia por capilaridad.
- Coloque sobre la membrana de transferencia los otros 3 trozos de papel de fil-
tro y la almohadilla totalmente humedecidos.
- Cierre el casete de transferencia y sujete todo el montaje con la pinza del case-
te. Ponga especial cuidado en no mover el montaje cuando cierre el casete.
Pág. 6
Manual de instrucciones 53001501
CASTELLANO
Revisión 1 Mayo-07
Please keep the original wrapping; you will always need it for returns enclosed with all
the accessories supplied.
Please check that all the accessories are enclosed with the equipment:
- 1 Transfer support
- 2 Cassettes with perforated plates
- 4 Pads
- Warranty
- User's manual
We will only accept any equipment return within 15 days after delivery and provided
it comes in its original wrapping.
4.2 Operating mode
Note: the equipment is exclusively designed for laboratory purposes; ambient tempera-
te must be 0-40 ºC and relative humidity must not exceed the 80%. Always work on a
plane, smooth and vibration-free surface.
Preparation of the gel for blotting
- Previously prepare 1 L of transfer buffer (Chart 1) and store it at 4 ºC. Note:
variations in pH, methanol concentration and presence or absence of detergents may
improve the efficiency of transfer and membrane binding of certain proteins.
C
1. Final concentration of the different components of the transfer buffer. Final pH
HART
must be 8.3.
Component
Final concentration
Tris base
24.8 M
Glycine
192 mM
Methanol
10% (v/v)
- After electrophoresis, transfer the gel to a recipient with 50 mL of transfer buf-
fer and let the gel equilibrate for 15-20 min. Note: gels must be perfectly equilibrated with
transfer buffer to remove the salts and detergents present in the electrophoresis buffer. If
gels are not equilibrated, blotting will generate excess heat during transfer and gels of less
than 12% acrylamide will shrink due to the methanol in the transfer buffer.
Transfer blot
Note: Handle membranes and filter paper only with gloved hands and clean forceps.
- Cut a piece of blotting membrane to dimensions slightly larger than the gel (1
or 2 mm on each side). Note: the most commonly used membranes for protein transfer
blot are nitrocellulose or PVDF membranes.
- If the membrane is made of PVDF, submerge it in 100% methanol for 10 s, then
in deionized water for 5 min and finally in transfer buffer for 10 min. Nitrocellulose mem-
branes can be directly submerged in transfer buffer. In any case, membrane must be com-
pletely wet; there should be no dry spots in the membrane.
Version 1 May-07
Instruction manual 53001501
ENGLISH
Page 15
Publicidad
