Capítulo 3 Secuenciación; Introducción; Generación De Grupos; Duración Del Experimento De Secuenciación - Illumina NextSeq550Dx Guía De Referencia

Capítulo 3 Secuenciación
Introducción
Flujo de trabajo de secuenciación
Preparación del cartucho de reactivo
Preparación de la celda de flujo
Preparación de bibliotecas para la secuenciación
Configuración de un experimento de secuenciación
Supervisión del progreso del experimento
Lavado automático posterior al experimento
Introducción
Para ejecutar un experimento de secuenciación en el instrumento NextSeq 550Dx, prepare un cartucho de
reactivo y una celda de flujo, y siga los mensajes del software para configurar e iniciar el experimento.
La generación de grupos y la secuenciación se realizan en el instrumento. Tras el experimento, se inicia un
lavado del instrumento de forma automática usando componentes cargados en él.
Generación de grupos
Durante la generación de grupos, las moléculas individuales de ADN se unen a la superficie de la celda de
flujo y, a continuación, se amplifican para formar grupos.
Secuenciación
Las imágenes de los grupos se obtienen mediante el uso de procesos químicos de secuenciación de dos
canales y combinaciones de filtro específicas para cada uno de los nucleótidos marcados con fluorescencia.
Tras finalizar la adquisición de imágenes de una placa en la celda de flujo, se procede a la adquisición de
imágenes de la placa siguiente. El proceso se repite para cada ciclo de secuenciación. Después del análisis
de imágenes, el software ejecuta las llamadas de bases, el filtrado y la puntuación de calidad.
Supervise el progreso y las estadísticas del experimento desde la interfaz del software de control, en la ficha
Run (Experimento) de BaseSpace o en un ordenador conectado a la red mediante el uso del software de
Sequencing Analysis Viewer (SAV). Consulte
Análisis
A medida que el experimento avanza, el software de control transfiere de forma automática archivos de
llamadas de bases (BCL) a BaseSpace o a la ubicación de salida especificada para el análisis secundario.
En función de la aplicación, hay varios métodos de análisis disponibles. Para obtener más información,
consulte la ayuda de BaseSpace (help.basespace.illumina.com).
Duración del experimento de secuenciación
La duración del experimento de secuenciación depende del número de ciclos realizados. La longitud
máxima del experimento es la de un experimento "paired-end" de 150 ciclos por cada lectura (2 × 150) y,
en el caso de las lecturas de índices, de hasta ocho ciclos por cada una de ellas, que son dos.
N.º de documento 1000000041922 v01 ESP
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
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