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Guía del sistema de secuenciación NextSeq 2000
Preparación de la celda de flujo y de las bibliotecas
Este paso lleva la celda de flujo a temperatura ambiente y diluye las bibliotecas a la concentración de
carga aplicable. Un volumen adicional opcional del 2 % de PhiX1
base, un control positivo o criterios de medición adicionales. El porcentaje de volumen adicional de PhiX
puede aumentarse para las bibliotecas con una diversidad de base menor. Las bibliotecas se
desnaturalizan de manera automática en el instrumento.
Estas instrucciones se aplican a las bibliotecas de Illumina compatibles que son bicatenarias. Realice
siempre un análisis de control de calidad, optimice la concentración de carga de su biblioteca y utilice
un método de normalización que genere bibliotecas bicatenarias. La normalización basada en bolas que
genera bibliotecas monocatenarias no es compatible con la desnaturalización integrada en el
instrumento.
Preparación de la celda de flujo y del cartucho
1.
Prepare la celda de flujo tal como se explica a continuación.
a. Extraiga una nueva celda de flujo de su almacenamiento a una temperatura entre 2 °C y 8 °C.
b. Aparte el paquete sin abrir a temperatura ambiente durante 10–15 minutos para evitar la
condensación cuando saque la celda de flujo del paquete. Si se prepara ahora la celda de flujo,
se asegurará de alcanzar la temperatura ambiente a tiempo.
2.
Si se utiliza el método de descongelación del refrigerador:
a. Extraiga el cartucho descongelado almacenado a una temperatura entre 2 °C y 8 °C.
b. Aparte el cartucho sin abrir a temperatura ambiente durante al menos 15 minutos antes de la
secuenciación. No supere las dos horas.
Dilución de la biblioteca a 2 nM
1.
Retire el tampón de resuspensión (RSB) de su almacenamiento a unas temperaturas entre -25 °C y
-15 °C. Otra posibilidad es utilizar 10 mM de Tris-HCl con tween 20 al 0,1 %, pH 8,5 en lugar del
RSB.
2.
[Opcional]
Retire el control PhiX a 10 nM preparado del almacenamiento con unas temperaturas
comprendidas entre -25 °C y -15 °C.
Solo se requiere PhiX para una adición opcional o si se va a realizar un experimento solo de PhiX.
3.
Descongele el RSB a temperatura ambiente durante 20 minutos.
4.
[Opcional]
Descongele el PhiX a temperatura ambiente durante cinco minutos y, a continuación,
cuantifique utilizando un método basado en la fluorescencia, como Qubit, para confirmar la
concentración de PhiX.
Si la cuantificación no es posible, siga con la concentración de 10 nM.
5.
Agite en vórtice la biblioteca o el PhiX brevemente y, a continuación, centrifugue a 280 × g durante
un minuto.
6.
Si usa el RSB como diluyente, prepare al menos 24 µl de bibliotecas a 2 nM en un microtubo de
baja unión.
Para ver las instrucciones de volumen adicional de PhiX, consulte
(opcional) en la página
1
PhiX es una biblioteca de Illumina pequeña y lista para usar con una representación equilibrada de nucleótidos.
N.º de documento 1000000109376 v01 ESP
Para uso exclusivo en investigación.
Prohibido su uso en procedimientos de diagnóstico.
32.
1
proporciona una diversidad de la
Adición de un control PhiX
31
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