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Nota: tampones que contengan
metanol puede deteriorarse si
se almacena por largos períodos
con metanol, justo antes de
la transferencia.
5. Electrotransferencia notas
• Ejecute el traslado tan pronto como sea
posible después de la electroforesis para mini-
mizar la difusión de proteínas en el gel.
• Geles apilados deben ser todos del
mismo tamaño.
• Limitar las transferencias a dos horas o menos.
• La concentración de metanol recomendado
para diferentes tipos de membrana son:
membrana tipo
Acusado de nylon
Nitrocelulosa
PVDF
• Utilizar un tampón con baja fuerza iónica
como uno de los dos se enumeran a conti-
nuación para evitar el sobrecalentamiento.
Utilizar el tampón CAPS cuando Tris no puede
ser utilizado (por ejemplo, la secuenciación
de péptidos). CAPS puede mejorar la transfe-
rencia debido a su efecto sobre la carga de la
proteína (ver Matsudaira, 1987).
Towbin tampón
(25 mM Tris, 192 mM glycina, 20% v/v metanol,
pH 8,3, 1 litro)
Tris (FW 121,1)
Glycina (FW 75,07)
SDS* (FW 288,4)
Disolver en 600 ml de agua destilada.
Añadir metanol como requerida
Llevar a 1 litro con agua destilada. No ajustar el pH,
el cual debe estar entre 8,2-8,4.
Opcional: Chill antes de su uso.
*Opcional: agregar SDS puede mejorar la eficiencia de transferencia.
†
Dependiendo del tipo de membrana seleccionado (ver tabla arriba), la
adición de metanol puede mejorar los resultados de transferencia.
% de metanol
0
10 – 20
10 – 20
25 mM
192 mM
0,1% (3,5 mM)
†
.
3,0 g
14,4 g
1,0 g
•
p17
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