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Síntomas
El lisado preprocesado es demasiado viscoso
para pipetearse.
10. Creación de un entorno sin ribonucleasa
Las ribonucleasas son extremadamente difíciles de desactivar. Procure evitar que se produzca actividad de ARNasa en
sus muestras de ARN durante y después del aislamiento. Esto es especialmente importante si el material de inicio fue
difícil de obtener o es irreemplazable. Las siguientes indicaciones le ayudarán a evitar la contaminación accidental de
sus muestras con ARNasa.
1.
Dos de las fuentes más comunes de contaminación con ARNasa son las manos del usuario y las bacterias u
hongos que puede haber en las partículas de polvo en suspensión. Para evitar la contaminación con estas fuentes,
utilice una técnica que garantice la esterilidad cuando deba manipular los reactivos suministrados con este
sistema. Utilice guantes en todo momento. Cambie de guantes siempre que pueda haber entrado en contacto con
ribonucleasas.
2.
Siempre que sea posible, deben utilizarse instrumentos de plástico estériles y desechables para manejar el ARN.
Estos materiales suelen carecer de ARNasa y no necesitan pretratamiento para desactivarla.
3.
Trate los instrumentos de vidrio y de plástico y las cámaras de electroforesis no estériles antes de usarlos para
asegurarse de que carezcan de ARNasa. Caliente los instrumentos de vidrio en el horno a 200 °C durante toda
la noche y enjuague a fondo los instrumentos de plástico con 0,1 N de NaOH y 1 mM de EDTA, seguido de agua
sin ARNasa. También pueden emplearse productos de eliminación de ARNasa convencionales, siguiendo las
instrucciones del fabricante.
Nota: Las cámaras de electroforesis pueden estar contaminadas con ribonucleasas, concretamente con
ARNasa A, del análisis de muestras de ADN. Siempre que sea posible, aparte los aparatos nuevos o
descontaminados para usarlos únicamente para el análisis del ARN.
4.
Trate las soluciones no suministradas con el sistema añadiendo pirocarbonato de dietilo (DEPC) al 0,1 % v/v
en una campana extractora. Incúbelas durante toda la noche a temperatura ambiente en la campana extractora,
removiendo cada cierto tiempo. Trátelas en la autoclave durante 30 minutos para eliminar cualquier resto de
DEPC.
Precaución: El DEPC es un posible carcinógeno, por lo que solo debería usarse en una campana extractora para
productos químicos. El DEPC reacciona rápidamente con las aminas y no puede utilizarse para tratar tampones
de Tris.
Nota: Para todas las aplicaciones posteriores, es crucial que siga protegiendo sus muestras de ARN de las
5295MA.eps
RNasas. Utilice guantes limpios y emplee soluciones sin ARNasa y tubos de centrífuga.
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Causas posibles y comentarios
El recuento leucocitario de la muestra de sangre estaba por encima
del rango de uso previsto del producto de entre 4 × 10
leucocitos/ml.
Se ha empleado un volumen incorrecto de sangre completa. Añadir una
cantidad mayor que 2,5 ml de sangre completa puede provocar que los
lisados sean viscosos y sea difícil pipetearlos.
y 10 × 10
6
6
15
TM434 · Revisión 3/21
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