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Opcional: Ajuste la solución de
acrilamida de mayor porcentaje
al 15% (w / v) de sacarosa o
25% (v / v) de glicerol para
mejorar estratificación.
3
Prepare la solución de monómero
Calcular el volumen de solución de monómero sea
necesario. Divida el volumen total a la mitad y la
preparación de este volumen tanto de las soluciones
de mayor y menor porcentaje de acrilamida.
4
Vierta la "luz" solución en la cámara de reserva (la
cámara lo más lejos posible de la toma). Abrir la
llave de paso entre las cámaras de tiempo suficiente
para desplazar el aire y cierre. Verter el "pesado"
solución en la cámara de mezcla y colocar una barra
de agitación en esta cámara. Coloque el fabricante
de gradiente sobre un agitador magnético y comenzar
agitación a una velocidad que se mezcla bien, pero no
introducir burbujas en la solución.
5
Mezclar el gradiente y bombear la solución en
el sandwich
Mientras que la solución se agita, empezar a bombear
desde la cámara de mezcla y abra la llave de paso a
la cámara de depósito. Levante la cánula que entre
líquido en el sándwich, manteniendo la punta en
la superficie del gel. Preparar más geles según sea
necesario.
6
Superponer cada gel con una delgada capa de agua-
butanol saturado, agua o tampón de gel diluida para
evitar la exposición al oxígeno de gel. Lentamente
entregar la solución de superposición de una jeringa
de vidrio equipado con una aguja de calibre 22.
Aplicar la solución cerca del espaciador en un lado
del emparedado y permitir que fluya a través de la
superficie sin ayuda.
7
Permitir que los geles para polimerizar durante un
mínimo de 1 h. Después de la polimerización, se
vierte la superposición y enjuagar la superficie del gel
varias veces con agua destilada.
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