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8.5 Unidad de iluminación de fluorescencia
Hay muestras que pueden ser excitadas con la ayuda de haces de luz y, por lo tanto,
presentan una radiación (emisión) que tiene una longitud de onda diferente a la de los
haces de excitación precedentes. La emisión es siempre de mayor longitud de onda
que la excitación (desplazamiento de Stokes). Este proceso se denomina
fluorescencia y puede servir de base para un método de contraste microscópico. La
forma más común de realizarlo es ampliando un microscopio de luz vertical con una
unidad de luz incidente de fluorescencia.
Principio
Dependiendo de la muestra, se requiere una luz de excitación que debe estar
contenida en el espectro de la fuente de luz (HBO o LED). El filtro de excitación sólo
deja pasar la banda de ondas correspondiente. La luz de excitación incide entonces
en un espejo dicroico, haciendo que se refleje hacia el objetivo y la muestra. Una vez
que la luz de excitación ha sido absorbida por la muestra, se emite luz de fluorescencia
(con una longitud de onda más larga que la luz de excitación). La parte de la luz
fluorescente que se emite hacia el objetivo puede pasar a través del espejo dicroico,
que también impide que la parte restante de la luz de excitación llegue a los oculares.
Y el filtro de bloqueo elimina finalmente de la trayectoria del haz todas las bandas de
onda que no pertenecen a la fluorescencia observada. Así, la imagen resultante se
construye exclusivamente con la luz fluorescente emitida por la muestra.
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OBN-13-BA-es-1510
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