Calibración De La Mezcla De Prueba De Lif Y Pruebas De Rendimiento; Unidades De Fluorescencia Relativa (Rfu); Factor De Corrección De Calibración (Ccf) - SCIEX PA 800 Plus Guía De Mantenimiento

Calibración de la mezcla de prueba de LIF
La detección de LIF se diferencia de la detección por absorbancia en algunos aspectos importantes.
Un detector de absorbancia mide una pequeña diferencia de intensidad en una fuente de luz de alta
intensidad. Es una técnica eficaz, porque el porcentaje de luz no cambia a medida que cambia
la intensidad de la fuente de luz. Esto significa que la respuesta de pico para una muestra permanece
constante a medida que la lámpara va envejeciendo o cuando se cambia una lámpara. Con la detección
de LIF, se mide la baja intensidad de la luz desde un fondo oscuro. Estas bajas intensidades se ven
influenciadas con más facilidad por los cambios en la trayectoria óptica. Se puede realizar una calibración
para corregir estas influencias mediante una mezcla de prueba suministrada por SCIEX. En este ejemplo,
el entorno corresponde a una calibración de LIF usando el láser de 488 nm con fluoresceína.

Unidades de fluorescencia relativa (RFU)

Los sistemas de detección de LIF son propensos a ofrecer una respuesta diferente cuando se realizan
cambios en la trayectoria óptica. Esto significa que una muestra de concentración conocida puede
dar resultados diferentes después de que se cambie un capilar o si la separación se ejecuta
en un instrumento diferente. Debido a esta incertidumbre, la respuesta del detector de LIF se indica
en unidades de fluorescencia relativa (RFU) en lugar de hacerlo en lúmenes o en otra unidad
de energía lumínica. Esto suele resultar aceptable para la detección por electroforesis capilar
siempre que se pueda asociar una concentración de muestra con una respuesta del detector.
Para proporcionar especificaciones de rendimiento para el detector de LIF, fue necesario desarrollar
una solución de mezcla de prueba fluorescente. Para la mezcla de prueba de rendimiento se optó
por sal sódica y fluoresceína 1 × 10
Factor de corrección de calibración (CCF)
Se utilizaron distintos sistemas de LIF para establecer un valor de respuesta esperado para la mezcla
de prueba de LIF. Para la prueba de rendimiento del capilar (de cristal de silicio sin recubrir, 60 cm
de longitud total y 75 μm), se determinó que la respuesta esperada del detector era de 35.
La mayoría de los sistemas probados estaban dentro del ± 10 % de este valor.
Para corregir esta variabilidad, puede calcularse un factor de corrección de calibración (CCF)
para cada sistema tal como se indica a continuación:
CCF = 35/M; donde la Respuesta esperada (objetivo) = 35 y la Respuesta medida = M
Guía de mantenimiento del sistema
RUO-IDV-05-5519-ES-B | A51964AF
y pruebas de rendimiento
-7
M en agua.
APÉNDICE A
Sistema de análisis farmacéutico PA 800 Plus
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