Calibración de LIF para diferentes soluciones fluorescentes
Una determinada aplicación puede requerir el uso de un marcador fluorescente especial. Según
el marcador, la longitud de onda de emisión puede ser considerablemente diferente
de la fluoresceína. En este caso, es probable que se necesiten distintos filtros. Con distintos filtros,
el objetivo de fluoresceína estándar ya no es válido. Aunque la fluoresceína pueda detectarse
en la nueva longitud de onda, se debería establecer un nuevo valor objetivo. También puede ser
necesario usar la solución fluorescente para la aplicación en lugar de fluoresceína. Establecer
un nuevo valor objetivo es sencillo. Utilice la calibración manual para establecer el CCF en 1,0.
Ejecute el método de separación de presión descrito anteriormente seis veces. Calcule el promedio
de la respuesta del cambio de escalón en las seis ejecuciones. Este valor es el nuevo objetivo.
Si una aplicación requiere un capilar recubierto, no se debe utilizar una solución de borato.
Sustituir el borato por agua debería ser seguro para la mayoría de los revestimientos de capilar.
Cuando se utilice agua en lugar de un tampón, no realice una mezcla 1:1 de fluoresceína con tampón
o agua. Inyecte la fluoresceína sin dilución.
Prueba de rendimiento del sistema estándar
La prueba de calibración estándar utiliza tampón de borato y una solución de mezcla de prueba
de fluoresceína mezclada 1:1 con tampón de borato. La mezcla de fluoresceína con tampón
es necesaria para lograr un cambio de escalón plano. El tampón de borato se utiliza porque
la prueba de rendimiento del sistema utiliza un paso de separación electroforética. No se puede
utilizar agua para una separación electroforética. Puede crear un método para un capilar de cristal
de silicio sin recubrir de 60 cm y 75 μm tal como se indica a continuación:
Figura A.4 Programa de tiempo para la prueba de rendimiento del sistema
Los viales de lavado y separación contienen borato y el vial de inyección contiene una mezcla
1:1 de fluoresceína y tampón. Se detecta un pico en aproximadamente 5 minutos.
Guía de mantenimiento del sistema
RUO-IDV-05-5519-ES-B | A51964AF
Sistema de análisis farmacéutico PA 800 Plus
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