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Cómo cuantificar las recuperaciones
Calcule la recuperación total, el porcentaje de recuperación de concentrado y el porcentaje de recuperación
de filtrado utilizando el método que se indica a continuación. Este procedimiento proporciona una estrecha
aproximación de las recuperaciones para las disoluciones que contienen concentraciones máximas de
aproximadamente 20 mg/ml.
NOTA: Las técnicas de ensayo apropiadas son la espectrofotometría de absorción, el radioinmunoensayo,
el índice de refracción y la conductividad.
Procedimiento de pesada
La densidad de la mayoría de las proteínas diluidas es casi igual a la densidad del agua (es decir, 1 g/ml).
Aprovechando esta propiedad, pueden cuantificarse los volúmenes de concentrado y de filtrado pesándolos
y convirtiendo las unidades de gramos a mililitros. Esta técnica es válida sólo para disoluciones con
concentraciones de aproximadamente 20 mg/ml o inferiores.
1.
Antes de usarlo, pese el recipiente de la muestra y un tubo de ensayo vacío (capacidad de 15 ml).
2.
Rellene el recipiente de la muestra con disolución y vuelva a pesar.
3.
Monte el filtro para centrífuga y centrifugue según las instrucciones. Decante el filtrado en el tubo
de ensayo pesado previamente. Si desea una mayor concentración, centrifugue una segunda vez,
decantando el filtrado en el tubo de ensayo que contiene el primer filtrado. Vuelva a pesar el tubo de
ensayo más los filtrados.
4.
Desmonte el dispositivo y vuelva a pesar el recipiente de la muestra más el concentrado.
5.
Reste el peso del tubo de ensayo vacío o del recipiente de la muestra para calcular los pesos del
material de partida, filtre y concentre.
6.
Ensaye el material de partida, el filtrado y el concentrado para determinar la concentración de soluto.
7.
Calcule las recuperaciones utilizando los datos de peso/volumen y las concentraciones medidas, de la
siguiente forma:
% de recuperación del concentrado = 100 ×
% de recuperación del filtrado = 100 ×
% de recuperación total = % de recuperación del concentrado + % de recuperación del filtrado
W
= peso total del concentrado antes del ensayo
c
W
= peso del material de partida original
o
W
= peso del filtrado
f
C
= concentración del concentrado
c
C
= concentración del material de partida original
o
C
= concentración del filtrado
f
10
W
× C
c
c
W
× C
o
o
W
× C
f
f
W
× C
o
o
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