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Caudal
La velocidad de filtración se ve afectada por diversos parámetros operativos, entre ellos la concentración
de la muestra, el volumen de partida, la fuerza centrífuga relativa, el tipo de rotor utilizado, el MWCO de la
membrana y la temperatura. Cuando se concentran disoluciones diluidas, los rotores de cubeta oscilante y
de ángulo fijo producen caudales comparables.
Para las disoluciones que contienen más del 10% de sólidos, un volumen de partida superior a 5 ml suele
provocar una reducción de los caudales. Un volumen de 5 ml o inferior produce los mayores caudales,
porque limita la cantidad de sólidos que pueden acumulares y obstruir la membrana.
Cuando se trabaja a bajas temperaturas deben prolongarse los tiempos de centrifugación. A 4 °C, los
caudales son aproximadamente 1,5 veces más lentos que a 25 °C. Las disoluciones viscosas pueden precisar
también tiempos de centrifugación más prolongados. Por ejemplo, utilizando un filtro Centriprep® 10K, una
disolución de 1 mg/ml de BSA en glicerina al 50% tardaría cinco veces más en concentrarse que la proteína
idéntica en una disolución acuosa tamponada.
Retención y recuperación
Las membranas hidrófilas y anisótropas de los filtros para centrífuga Centriprep® se caracterizan por
un límite de peso molecular, es decir, por su capacidad para rechazar moléculas por encima de un peso
molecular específico.
Dado que es un parámetro fácil con el que trabajar, el peso molecular se utiliza para clasificar la
permeabilidad y la selectividad de la membrana en función de los resultados obtenidos con proteínas bien
caracterizadas.
Sin embargo, el peso molecular puede no ser válido para todos los solutos. Por ejemplo, la capacidad de
retención puede ser mayor para una molécula globular que para una molécula lineal que tenga el mismo
peso molecular nominal. Cuando se evalúe la capacidad de retención del soluto deben considerarse
también los efectos del pH y la fuerza iónica sobre las dimensiones y el comportamiento de una molécula
en una disolución particular.
Una baja recuperación de soluto en el concentrado puede indicar posibles pérdidas por adsorción o por
paso a través de la membrana. Las pérdidas por adsorción dependen de la concentración del soluto y su
naturaleza (hidrófobo o hidrófilo), la temperatura, el tiempo de contacto con las superficies, la composición
de la muestra y el pH.
Recuperación de concentrado típica
Soluto y concentración de partida
Albúmina sérica bovina (1 mg/ml)
Ovalbúmina (1 mg/ml)
Quimotripsinógeno (1 mg/ml)
α-
Citocromo C (0,25 mg/ml)
Vitamina B12 (0,2 mg/ml)
Volumen de partida 15 ml, 25 °C, rotor oscilante
Resultados basados en los tiempos de centrifugación recomendados indicados en la sección "Tiempos de
concentración para disoluciones proteicas diluidas"
Filtros para centrífuga Centriprep® 10K y 30k
Peso
Centriprep®, % de recuperación
molecular
nominal
67.000
45.000
25.000
12.400
1.355
del concentrado
10K
97
95
93
96
–
30K
98
90
–
8
5
7
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