Controles Negativos/Sin Teñir - Cytek Biosciences Northern Lights NL-CLC Manual Del Usuario

Las muestras multicolores se pueden adquirir como datos sin procesar y también
deconvolucionarlas después de la adquisición. Esto se puede hacer en el módulo Acquisition
o en el módulo Extra Tools.
Flujos de trabajo de deconvolución
DECONVOLUCIÓN EN TIEMPO REAL
En el módulo de adquisición
Adquiera todos los controles de referencia
Haga clic en Unmix (deconvolucionar)
Compruebe
(Extracción de
ajuste las ventanas de adquisición
de histograma y espectrales.
Haga clic en Live Unmixing
(Deconvolución en tiempo real)
Adquiera muestras en una hoja de trabajo
deconvolucionada. Se guardan los
archivos FCS tanto sin procesar como
deconvolucionados.
Controles negativos/sin teñir
Además de los controles de referencia positivos necesarios para la deconvolución espectral,
también es necesario un control sin teñir para evaluar la autofluorescencia. El control sin teñir
tiene que ser del mismo tipo y estar preparado de la misma manera que las muestras, ya que esto
garantizará una deconvolución y una extracción de autofluorescencia precisas, si se desea. Lo ideal
es que los controles de referencia, el control sin teñir y las muestras sean todos del mismo tipo de
muestra y se preparen de la misma manera.
Además de evaluar la autofluorescencia, hay que determinar también la contaminación espectral
de la fluorescencia. Para corregir la contaminación espectral, se puede utilizar el control de
autofluorescencia sin teñir si coincide con el tipo de muestra y de control de referencia.
Sin embargo, si los controles de referencia no coinciden con el tipo de muestra y no contienen
una población negativa en cada tubo (solo tienen picos positivos), debe utilizar un control de
contaminación espectral independiente sin teñir que coincida con el tipo de control de referencia.
DECONVOLUCIÓN POSTERIOR A LA ADQUISICIÓN
En el módulo de adquisición
Adquiera todos los controles
de referencia y muestras.
Haga clic en Unmix
Compruebe
(Extracción de
ajuste las ventanas de adquisición
de histograma y espectrales.
Haga clic en Unmix, Save & Open
(Deconvolucionar, guardar y abrir)
Se crea automáticamente un
experimento nuevo de análisis. Solo
se guardan los archivos FCS
deconvolucionados. El archivo
de datos sin procesar se guarda
en el experimento original.
En el módulo de herramientas adicionales
Los controles de referencia y las muestras
se adquirieron previamente (archivos FCS).
[Es posible que los controles de referencia
no se hayan procesado como tales o que
no todos estén en el mismo experimento].
Haga clic en Spectral Unmixing
(Deconvolución espectral)
Importe archivos FCS. Designe tipos
para muestras con tinción única.
Ajuste las ventanas de adquisición
de histograma y espectrales.
Haga clic en Unmix
Solo se guardan los archivos
FCS deconvolucionados.
Capítulo 6: Deconvolución y compensación 65