Qiagen ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR Manual página 30

Antes de comenzar
Descongele todos componentes necesarios salvo la enzima ADN

polimerasa Taq, que se debe mantener en el congelador cuando no se
utilice. Coloque los tubos que contienen los componentes que se deben
descongelar en hielo.
Nota: no tarde más de 30 minutos en llevar a cabo la descongelación
para evitar la degradación de los materiales.
Limpie la zona de trabajo dedicada a la preparación de la mezcla de PCR

para asegurarse de que no se contaminan los moldes ni las nucleasas.
Mezcle bien pipeteando hacia arriba y abajo 10 veces los tubos que

contienen la mezcla para qPCR ABL1 y la mezcla para qPCR Mbcr y
centrifúguelos brevemente antes de utilizarlos. A continuación, consérvelos
en hielo.
Procedimiento
1. Prepare la siguiente mezcla maestra (master mix) de PCR según el número
de muestras que vayan a procesarse.
En la tabla 4 se describe el esquema de pipeteo para la preparación de
una mezcla de reactivos, calculada para lograr un volumen de reacción
final de 25 µl. Se prepara una premezcla, según el número de reacciones,
utilizando la misma mezcla de primers y sondas (mezcla para qPCR ABL1
o mezcla para qPCR Mbcr). Se incluyen volúmenes extra para compensar
los errores de pipeteo.
Nota: no utilice volúmenes de reacción (mezcla de reacción más muestra)
inferiores a 25 µl.
30 Manual del kit ipsogen BCR-ABL1 Mbcr RGQ RT-PCR 12/2014