Teoría De Fluorescencia - WATERS CORPORATION 2475 Multi Guia De Funcionamiento

Teoría de fluorescencia
La fluorescencia se produce cuando algunas moléculas absorben la luz a
determinadas longitudes de onda, lo que hace que pasen a un estado superior
de energía. Al volver a su estado de energía normal, las moléculas "excitadas"
liberan la energía absorbida en forma de fotones.
Muchos compuestos orgánicos absorben la luz, pero pocos dan respuesta
fluorescente. Los sistemas HPLC que incorporan detección de fluorescencia
identifican con eficacia hidrocarburos poliaromáticos, aflatoxinas, vitaminas,
aminoácidos, etc. Los métodos de derivatización química amplían la detección
de fluorescencia a algunos compuestos no fluorescentes como los pesticidas
carbamatos.
La detección de fluorescencia requiere tanto longitud de onda de excitación
como de emisión, que produce un grado superior de sensibilidad. Como
resultado, esta técnica es útil para análisis que requieren límites de detección
bajos.
Algunas condiciones pueden interferir con la capacidad de un compuesto de
dar respuesta fluorescente, disminuyendo el rendimiento analítico:
• Cambios de pH: la pérdida o ganancia de protones y el incremento o
disminución de carga que conlleva afecta a la estructura electrónica de
un analito y puede aumentar o disminuir la fluorescencia.
• Cambios de temperaura: la fluorescencia disminuye a medida que la
temperatura aumenta.
• Cambios de la cantidad de oxígeno disuelto: en algunas moléculas la
presencia de oxígeno disuelto disminuye la fluorescencia.
Los detectores de fluorescencia se pueden adaptar para medir la
quimioluminiscencia, con la que una molécula sin exposición a ninguna
energía de excitación emite una señal de intensidad baja. Este tipo de
detección se puede adaptar desactivando la fuente de luz o (como en el caso del
detector 2475) activando un obturador para impedir que cualquier luz de
excitación alcance la celda de flujo.
1-2 Teoría de funcionamiento