Descripción General Del Instrumento Y Uso Previsto - Agilent Seahorse XF Pro Guia Del Usuario

Descripción general del instrumento
y uso previsto
El analizador Agilent Seahorse XF Pro mide la tasa de cambio del oxígeno disuelto y
del pH en el medio que rodea inmediatamente a las células vivas cultivadas en una
microplaca. Los cambios en el medio extracelular son causados por el consumo o
la producción de analitos por parte de las células. Por lo tanto, puede utilizarse una
medición sensible del flujo del medio para determinar las tasas de metabolismo
celular con gran sensibilidad y de forma totalmente no invasiva y sin marcadores.
Una característica única de la tecnología Seahorse XF es su capacidad para
realizar mediciones precisas y repetibles en tan solo cinco minutos. El instrumento,
que funciona con un cartucho de sensores, aísla unos pocos µl de medio sobre la
monocapa celular. El metabolismo celular provoca cambios rápidos y fáciles de
medir en el "microentorno" existente en este pequeño volumen.
Se necesita un cartucho de sensores XF para realizar un ensayo. El cartucho tiene
96 sondas, y cada sonda tiene un único punto sensor multifluor que es sensible
tanto a la concentración de oxígeno como de protones. El sistema mide la
concentración de cada analito en función del tiempo y calcula automáticamente la
tasa de consumo de oxígeno (OCR) y la tasa de flujo de salida de protones (PER),
que es una medida cuantitativa de la tasa de acidificación extracelular (ECAR),
simultáneamente en cada pocillo de la microplaca.
Normalmente, se realiza un ciclo de medición durante 6 minutos. El medio se
mezcla de forma suave, la sonda se coloca a 200 µm por encima del fondo del
pozo y se miden los niveles de analitos.
Las tasas metabólicas de referencia se miden normalmente tres o cuatro veces y
se informan en pmol/min para OCR, mpH/min para ECAR y pmol/min para PER.
El compuesto se añade al medio y se mezcla, y luego se realizan y repiten las
mediciones de OCR y ECAR posteriores al tratamiento. A medida que las células
cambian las vías metabólicas, la relación entre OCR y ECAR/PER cambia.
El sistema XF Pro, compuesto por un analizador de sobremesa y un controlador de
pantalla táctil, está controlado por el software de escritorio Seahorse Wave Pro de
Agilent. Este software permite todos los aspectos de los ensayos Seahorse XF,
incluyendo la configuración del ensayo, el control instrumental y el análisis de datos.
Manual de funcionamiento del analizador Seahorse XF Pro
Descripción general del instrumento y uso previsto
Introducción 1
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