Principios De Funcionamiento; Colocación De Placas; Excitación Del Láser; Barrido - Agilent SureScan G4900DA Guia Del Usuario

Principios de funcionamiento

En esta sección se describen las características de funcionamiento del escáner SureScan.
Colocación de placas
El escáner SureScan tiene capacidad para un total de 24 placas de 1  3 pulgadas en un cassette
no extraíble. Durante el barrido, las placas se trasladan consecutivamente a la posición de barrido,
se realiza el barrido y luego vuelven al cassette. Las placas pueden añadirse o retirarse de la cola del
escáner dinámicamente sin necesidad de detener el escáner.
Excitación del láser
El escáner SureScan utiliza dos láseres, un láser verde de estado sólido bombeado por diodos
(532 nm) y un láser rojo de diodos (640 nm). Los láseres excitan el RNA o DNA con etiqueta
de cianina 3 (Cy-3) y cianina 5 (Cy-5) para medir la fluorescencia tras la hibridación del ácido
nucleico en las sondas de microarrays. También es posible utilizar tintes similares a Cy-3 y
Cy-5, como tintes Alexa 647, 555 y 660.
El escáner SureScan se ha optimizado para obtener una relación señal-ruido alta en bandas de
emisión de Cy-3 (550 – 610 nm) y Cy-5 (650 — 750 nm). Cuenta con un amplio intervalo dinámico
y una baja diafonía espectral, lo que permite la medición de una amplia gama de concentraciones
diana y una mayor confianza en los datos con niveles de señal más bajos.

Barrido

El barrido de la excitación del láser se realiza rápidamente de arriba a abajo a lo largo de la
microarray. El enfoque automático dinámico garantiza que la microarray siempre esté colocada
en el plano focal de la lente de barrido, lo que da como resultado una intensidad calibrada
y uniforme del barrido.
Detección de fluorescencia
La fluorescencia de las muestras con etiquetas se convierte en una señal eléctrica mediante
un tubo fotomultiplicador (PMT) de alto rendimiento. Los amplificadores de ruido muy bajo
y los integradores digitales procesan la señal del PMT en una medición digital que se graba
en el archivo TIFF.
Guía del usuario del Sistema SureScan 14