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problema
Patrones difusos de la banda
Unión a la membrana ineficiente
Los parámetros químicos
Parámetros de membrana
•
p12
solución
Transferencia inmediatamente después de la separación electro-
forética. Si equilibrante antes de la transferencia, acortar o elimi-
nar el tiempo de equilibrado o mover el gel a la habitación fría
durante equilibración.
Si tampón de transferencia contiene metanol (≥ 10%), equilibrar el
gel en tampón de transferencia durante 30 minutos para permitir que
se contraiga antes de ensamblar la pila. Nota: Debido a metanol hace
que el gel se encogen un poco, las moléculas de gran tamaño pueden
migrar con mayor lentitud.
Tenga cuidado de que el gel se mantiene firmemente contra la
membrana y que no se desplaza una vez se hace contacto.
Si se produce un exceso de calentamiento durante la transferencia,
bajar la temperatura del fluido de enfriamiento en el intercambiador
de calor.
Comprobar que la superficie preferida de unión de la membrana (si lo
hay) en contacto con el gel.
Fijar o reticular la molécula en la membrana de acuerdo con los
requisitos del ácido nucleico, proteína o tipo de membrana.
Preparar buffer de proteína de transferencia sin SDS.
Compruebe que la cantidad óptima de metanol necesario para el
tipo de membrana y comprobar la solución tampón. Añadir 10-20%
de metanol para el tampón de transferencia para mejorar la unión a
nitrocelulosa.
Use guantes para manipular las membranas.
Membranas Almacenar a temperatura ambiente fuera de la luz directa
del sol para mantener las membranas activadas.
Utilizar una membrana con un tamaño de poro más pequeño
(0,10-0,20 µm) si las proteínas pasan a través de la membrana, o
utilizar un tipo diferente de membrana.
Lugar una membrana tanto encima y por debajo del gel si se sospe-
cha una proteína se mueve en la dirección opuesta a la mayoría de
las proteínas. Compruebe las dos membranas de proteína(s).
Compruebe si muestra demasiado está disponible para el área de
la superficie de unión mediante la aplicación de dos membranas
en lugar de uno. Si "soplar a través de" ocurre, reducir la carga de
la muestra.
Para obtener más consejos de solución de prob-
lemas, consulte Bjerrum, O.J. et al. (1988).
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