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Optimización del sistema LC Agilent 1290 Infinity
Cómo conseguir una resolución más elevada
*
separaciones de gradientes, la retención se describe por k
en la ecuación
siguiente:
donde:
*
• k
= valor medio de k,
• t
= longitud de tiempo del gradiente (o segmento del gradiente) (min),
G
• F = flujo (ml/min),
• V
= volumen de retardo de columna,
m
• %B = cambio en la fracción de disolvente B durante el gradiente,
• S = constante (ca. 4-5 para moléculas pequeñas).
Esto muestra que k y de ahí la resolución puede aumentarse teniendo un gra-
diente menos profundo (el cambio de 2 hasta 5 %/min es una guía), una veloci-
dad de flujo más alta y una columna de volumen más baja. Esta ecuación
también muestra cómo acelerar un gradiente existente; si se duplica el flujo
*
pero el tiempo del gradiente se divide por la mitad, k
permanece constante y
la separación parece igual pero se produce en la mitad de tiempo. Una investi-
gación publicada recientemente ha demostrado cómo una columna STM más
corta (a temperaturas por encima de 40 °C) pueden generar una capacidad de
picos superior que una columna STM más larga debido a un funcionamiento
más rápido. (Consulte Petersson et al., J.Sep.Sci, 31, 2346-2357, 2008, Maximi-
zing peak capacity and separation speed in liquid chromatography).
Cualquier reducción en el volumen de la columna extra reducirá la dispersión
y dará una resolución mejor. Esto ya se ha optimizado en el sistema LC 1290
Infinity con capilares de diámetro más estrecho (0,12 mm de d.i.) (compruebe
que se utiliza la longitud más corta entre la columna y el detector) y la celda
de flujo de portador Max-light.
Finalmente, cualquier ganancia en la resolución deberá preservarse mediante
una recopilación de datos que sea lo suficientemente rápida para crear un per-
fil preciso de los picos estrechos.
Manual y guía de referencia rápida del sistema LC Agilent 1290 Infinity
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