Agilent Technologies LC Agilent 1290 Infinity Manual Y Guía De Referencia Rápida página 63

Una señal o un cromatograma UV es una representación de datos de la absor-
bancia con respecto al tiempo y se define por su longitud de onda y su anchura
de banda.
• La longitud de onda indica el centro de la banda de detección.
• La anchura de banda define el rango de longitud de onda sobre el que se
Por ejemplo, una señal a una longitud de onda de 250 nm y con una anchura
de banda de 16 nm tendrá una absorbancia media de 242 nm a 258 nm. Ade-
más, se puede definir una longitud de onda y una anchura de banda de refe-
rencia para cada señal. La absorbancia media de la anchura de banda de
referencia, centrada en la longitud de onda de referencia, se restará de su
valor equivalente en la longitud de onda de la señal para generar el cromato-
grama de salida.
Es posible seleccionar la anchura de banda y la longitud de onda de la señal de
forma que estén optimizadas para:
• la detección universal de banda ancha,
• la detección selectiva de banda estrecha,
• la sensibilidad para un analito específico.
La detección universal o de banda ancha funciona con una anchura de banda
amplia para detectar cualquier especie con absorbancia en dicho rango. Por
ejemplo, para detectar todas las moléculas absorbentes entre 200 nm y
300 nm, fije una señal a 250 nm con una anchura de banda de 100 nm. La des-
ventaja es que la sensibilidad no será óptima para ninguna de estas moléculas.
La detección selectiva o de banda estrecha se utiliza con mucha más frecuen-
cia. Se examina el espectro UV correspondiente a una molécula concreta y se
selecciona un máximo de absorbancia adecuado. Si es posible, se debe evitar el
rango en el que los disolventes absorban de forma acusada (por debajo de
220 nm en el caso del metanol y por debajo de 210 nm en el caso del acetoni-
trilo). Por ejemplo, en la
máximo de absorbancia adecuado a 252 nm. Una anchura de banda estrecha
de entre 4 nm y 12 nm ofrece generalmente una buena sensibilidad y es espe-
cífica para la absorbancia en un rango estrecho.
En el caso de una molécula concreta, es posible optimizar la banda estrecha en
términos de la sensibilidad. Al aumentar la anchura de banda, no solo se
reduce la señal, sino también el ruido, con lo existirá un punto óptimo para
alcanzar la mejor señal/ruido. Como guía aproximada, este punto óptimo suele
Manual y guía de referencia rápida del sistema LC Agilent 1290 Infinity
promedian los valores de absorbancia para generar el resultado en cada
punto de tiempo.
Optimización del sistema LC Agilent 1290 Infinity
Cómo conseguir una sensibilidad más elevada
Figura 23 en la página 65, el ácido anísico tiene un
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