Teoría Del Ensayo De Proteínas De Pierce - Thermo Scientific NanoDrop One Guia Del Usuario

Medición de Proteínas de Pierce 660
Teoría del ensayo de Proteínas de Pierce 660
El ensayo de proteínas Pierce 660 se basa en la fijación de un complejo de colorante-metal
patentado a proteínas en condiciones ácidas que provoca un cambio en el máximo de
absorción del colorante, que se mide a 660 nm. El complejo de colorante con metal es marrón
rojizo y cambia a verde al fijarse a la proteína. El cambio de color se produce por
desprotonación del colorante con un pH bajo facilitado por la interacción con grupos de
aminoácidos cargados positivamente en proteínas. El colorante interacciona principalmente
con residuos básicos de proteínas como la histidina, la arginina y la lisina, y en menor medida
la tirosina, el triptófano y la fenilalanina. El producto de la reacción se mide a 660 nm y se
corrige en línea base utilizando el valor de absorbancia a 750 nm.
El color producido en el ensayo es estable y aumenta en proporción con una amplia gama de
concentraciones proteínicas en aumento. Se puede agregar al ensayo el reactivo opcional
IDCR (Ionic Detergent Compatibility Reagent), que aumenta la compatibilidad con
numerosos con detergentes iónicos, incluido el tampón de muestras Laemmli SDS con azul de
bromofenol. El IDCR se disuelve completamente con la mezcla minuciosa y no tiene ningún
efecto en el ensayo. Puede solicitar kits preformulados del material de fijación a proteínas a un
distribuidor local o a nosotros mismos. Para obtener información sobre IDCR, consulte al
fabricante del kit.
Kits y protocolos del ensayo de proteínas
Visite la información del sitio web de NanoDrop sobre los kits y protocolos actualizados de los
instrumentos NanoDrop One. Siga las recomendaciones del fabricante del kit del ensayo para
todos los patrones y muestras (desconocidas). Asegúrese de utilizar en todo el ensayo los
mismos tiempos y temperatura.
El fabricante del kit también puede suministrar patrones de proteínas para generar una curva
estándar. Dado que los pedestales de NanoDrop One pueden medir concentraciones
proteínicas más altas que los espectrofotómetros tradicionales de cubeta, puede que necesite
suministrar sus patrones de proteínas propios con concentraciones más altas que las
proporcionadas por el fabricante. Por ejemplo, con otros patrones puede ser necesario
asegurarse de que la curva estándar cubra el rango dinámico del ensayo y el rango esperado de
muestras desconocidas.
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