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4
Fallo en la desnaturalización: Para una correcta desnaturalización las muestras deben ser
calentadas el tiempo indicado en el apartado 7 de este documento, y posteriormente mantener
en frio hasta la carga en el secuenciador.
5
Fallo en la PCR: Compruebe que el programa de PCR es el indicado.
6
Cantidad excesiva de ADN: Asegúrese de estar usando la cantidad adecuada de ADN. Si es así,
diluya el producto de PCR en agua estéril desionizada y prepare de nuevo la desnaturalización y
carga en el secuenciador.
7
Contaminación: Puede ser producida por otro ADN molde o por un ADN previamente
amplificado. La contaminación cruzada puede dar lugar a falsos positivos y negativos, derivando
todo ello en problemas en la interpretación de los resultados. Use puntas de pipeta con filtro y
cambie los guantes regularmente.
8
Artefactos característicos de las expansiones: La amplificación de expansiones genera
artefactos que aparecen como picos más pequeños, y alejados 3 pares de bases del pico
predominante.
9
Mosaicismo: En algunos SCAs, como el SCA2 y el SCA6, han sido descritos casos de mosaicismo,
por lo tanto es posible, aunque poco probable, encontrar más de un genotipo en una muestra. En
este caso aconsejamos repetir la PCR, y en caso de obtener el mismo patrón, utilizar una nueva
muestra del paciente, a ser posible de otro tejido (ej. mucosa bucal).
Rev. 5
28/02/2020
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