Microscopie À Fond Noir À Fort Grossissement - Optika Italy B-510 Serie Manual De Instrucciones

12.3 Microscopie à fond noir à fort grossissement
Pour un travail plus précis et des arrière-plans plus noirs, vous pouvez choisir un condenseur conçu spécialement pour le
fond noir, c'est-à-dire pour ne transmettre que des rayons obliques. Il existe plusieurs variétés: condenseurs à fond noir "
sec " avec de l'air entre le dessus du condenseur et le dessous des condenseurs à fond noir à glissière et à immersion qui
nécessitent l'utilisation d'une goutte d'huile d'immersion (certains sont conçus pour utiliser de l'eau) établissant le contact
entre le dessus du condenseur et le dessous de la lame de l'échantillon. Le condenseur à immersion à fond noir a des
surfaces internes en miroir et passe des rayons d'une grande obliquité et exempts d'aberration chromatique, produisant les
meilleurs résultats et le fond le plus noir.
Le condenseur à fond noir le plus utilisé est peut-être le paraboloïde, constitué d'un morceau de verre massif rectifié avec
une grande précision en forme de paraboloïde.
Comme on l'a vu plus haut, le condenseur à fond noir sec est utile pour les objectifs dont l'ouverture numérique est infé-
rieure à 0.75, tandis que les condenseurs paraboloïdes et à immersion cardioïde (Fig. 23) peuvent être utilisés avec des
objectifs à très grande ouverture numérique (jusqu'à 1.4). Les objectifs dont l'ouverture numérique est supérieure à 1.2
nécessiteront une certaine réduction de leur ouverture de travail, car leur ouverture numérique maximale peut dépasser
l'ouverture numérique du condenseur, permettant ainsi à la lumière directe de pénétrer dans l'objectif.
Pour cette raison, de nombreux objectifs à ouverture numérique élevée conçus pour être utilisés avec des éclairages en
fond noir ou en fond clair sont équipés d'un diaphragme à diaphragme réglable intégré qui agit comme butée d'ouverture.
Cette réduction de l'ouverture numérique limite également le pouvoir de résolution de l'objectif ainsi que l'intensité de la
lumière dans l'image. Les objectifs spécialisés conçus exclusivement pour le travail en fond noir sont produits avec une
ouverture numérique maximale proche de la limite inférieure de l'ouverture numérique du condenseur en fond noir. Ils n'ont
pas de diaphragmes à diaphragme interne, mais les diamètres des monture d'objectif sont ajustés pour qu'au moins un
objectif interne ait le diamètre optimal pour fonctionner comme diaphragme d'ouverture.
Le condenseur cardioïde est très sensible à l'alignement et doit être positionné avec soin pour tirer parti du cône d'illumi-
nation très aigu, ce qui en fait le condenseur fond noir le plus difficile à utiliser. De plus, le condenseur produit une quantité
importante d'éblouissement, même à partir des particules de poussière les plus infimes, et la courte distance focale peut
entraîner un mauvais éclairage sur des objets dont la taille ou l'épaisseur dépasse quelques microns. Lorsque vous choi-
sissez des lames de microscope pour la microscopie quantitative à fond noir à fort grossissement, assurez-vous de choisir
des lames faites d'un mélange de verre exempt d'impuretés fluorescentes.
Une attention particulière doit être portée aux détails du huilage d'un condenseur à ouverture numérique élevée jusqu'au
fond de la lame de l'échantillon. Il est très difficile d'éviter l'introduction de minuscules bulles d'air dans la zone située entre
la lentille supérieure du condenseur et le fond de la lame du microscope, et cette technique doit être pratiquée à la perfec-
tion. Les bulles d'air provoquent une éruption et une distorsion de l'image, ce qui entraîne une perte de contraste et une
dégradation générale de l'image.
Des problèmes se posent également lors de l'utilisation de lames de microscope trop épaisses ou trop minces. De nom-
breux condenseurs à fond noir contiennent la gamme d'épaisseur de glissière utilisable inscrite directement sur le support
du condenseur. Si la lame est trop épaisse, il est souvent difficile de focaliser le condenseur sans recourir à une huile
d'immersion plus visqueuse. Par contre, les lames trop minces ont tendance à rompre le lien d'huile entre le condenseur
et la lame. C'est une bonne idée d'acheter des lames de microscope de précision de la bonne épaisseur pour éviter les
problèmes mentionnés ci-dessus.
Les condenseurs à ouverture numérique élevée, qu'ils soient destinés à être utilisés à sec ou à l'huile, doivent être centrés
avec précision sur le trajet optique du microscope pour obtenir des performances optimales.
Pour ce faire, de nombreux condenseurs à fond noir sont construits avec un petit cercle gravé sur la surface supérieure
pour faciliter le centrage du condenseur. Le centrage est effectué avec un objectif de faible puissance (10x-20x) en imagi-
nant le cercle gravé et en utilisant les vis de centrage du condenseur pour s'assurer que le cercle (et le condenseur) sont
correctement centrés dans le chemin optique.
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