Waters ACQUITY Premier Guía De Mantenimiento página 16

2.1.1.4 Excitación de la muestra
La banda ancha de luz de alta intensidad de la lámpara pasa a través de un filtro o
monocromador, que selecciona una banda estrecha de longitudes de onda. Esta banda estrecha
de luz después se dirige a la celda de flujo, donde excita a los analitos al pasar. Las longitudes
de onda de excitación a menudo se corresponden con la longitud de onda de absorbancia del
analito.
2.1.1.5 Celda de flujo
La celda de flujo de cuarzo minimiza la cantidad de luz difusa que puede afectar la medición y
maximiza la señal de fluorescencia. El compartimento de muestras se dispone de tal manera que
la energía de fluorescencia se captura en un ángulo perpendicular al haz (lámpara) de
excitación. Esta disposición minimiza el efecto de la difusión de Rayleigh en niveles de luz de
fondo.
2.1.1.6 Celda de cubeta
El detector ACQUITY Premier FLR con la lámpara de Hg/Xe proporciona una mayor sensibilidad
de la que era posible utilizando los sistemas tradicionales de fluorescencia con cromatografía
líquida de alto rendimiento (HPLC). Sin embargo, el nuevo perfil de energía puede requerir que
el espectro de excitación de los analitos se tenga que desviar considerablemente para que
coincida con las bandas de energía de la lámpara de Hg/Xe, lo que requiere optimizar un método
de detección de HPLC tradicional para su uso con este detector. Para determinar los valores
optimizados, se pueden hacer barridos de los intervalos de longitud de onda de excitación y de
emisión con la celda de cubeta y ver el gráfico del espectro en la consola del detector o en el
software Empower mediante la función de gráfico Spectrum λ-λ (Espectro λ-λ).
2.1.2 Medición de la fluorescencia
Para medir la fluorescencia en la celda de flujo, el detector tiene que equilibrar la necesidad de
una alta selectividad (para distinguir longitudes de onda de fluorescencia muy específicas) con la
necesidad de una alta sensibilidad (para medir intensidades bajas de fluorescencia).
2.1.2.1 Cuantificación
La fluorescencia es lineal a concentraciones bajas; sin embargo, puede dejar de serlo a altas
concentraciones.
2.1.2.2 Selección de la longitud de onda de emisión
Un monocromador selecciona una longitud de onda de emisión.
2.1.2.3 Tubo fotomultiplicador
El tubo fotomultiplicador (PMT) produce una corriente proporcional al flujo de fotones emitidos
por las moléculas en la celda de flujo.
10 de noviembre de 2021, 715006949ES Versión 01
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