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Imegen IMG-227 Instrucciones De Uso

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Instrucciones de Uso
®
Imegen
Pancreatitis NGS
Análisis genético molecular de los genes
CFTR, PRSS1, SPINK1, CTRC y CASR relacionados
con pancreatitis mediante NGS
REF
IMG-227
Fabricado por:
Instituto de Medicina Genómica SL
Agustín Escardino 9,
Parc Científic de la Universitat de València
46980 Paterna (Valencia, España)
+34 963 212 340 - info@imegen.es
imegen.es
Rev. 4. 07/02/2019
Página 1 de 16

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Resumen de contenidos para Imegen IMG-227

  • Página 1 NGS IMG-227 Fabricado por: Instituto de Medicina Genómica SL Agustín Escardino 9, Parc Científic de la Universitat de València 46980 Paterna (Valencia, España) +34 963 212 340 - info@imegen.es imegen.es Rev. 4. 07/02/2019 Página 1 de 16...
  • Página 2 Imegen le garantiza que todos sus productos están libres de defectos, tanto en los materiales empleados como en su proceso de fabricación. Esta garantía se hace extensible hasta la fecha de caducidad, siempre que se observen las condiciones de conservación especificadas en este manual.

  • Página 3: Tabla De Contenido

    Índice 1. Información general 2. Uso previsto 3. Advertencias y precauciones de seguridad 4. Contenido y condiciones de almacenamiento del kit 5. Equipos, reactivos y materiales necesarios que no se suministran 6. Protocolo de ensayo 6.1 Preparación de los reactivos 6.2 Normalización de los productos de PCR 7.

  • Página 4: Información General

    1. Información general La pancreatitis hereditaria (MIM #167800) se caracteriza por dolor abdominal crónico, deterioro de las funciones endocrina y exocrina del páncreas, náuseas y vómitos, alteraciones de la digestión, diabetes, pseudoquistes, obstrucción del conducto biliar y del duodeno y cáncer de páncreas. Aunque, la sintomatología y el curso de la enfermedad varían entre personas.

  • Página 5: Uso Previsto

    Este kit ha sido validado utilizando muestras de ADN de la Unidad de Genética Médica de imegen previamente genotipadas mediante el uso de otras tecnologías. Imegen-Pancreatitis NGS es sólo para uso en investigación y está dirigido a profesionales del sector de la biología molecular.

  • Página 6: Advertencias Y Precauciones De Seguridad

    12. El fabricante no garantiza la reproducibilidad del ensayo cuando el usuario introduce reactivos no validados por imegen, por considerarlos equivalentes a los suministrados en el kit. Rev. 4. 07/02/2019...

  • Página 7: Contenido Y Condiciones De Almacenamiento Del Kit

    20 x 25 µl -20ºC Binding Buffer 5 ml Tª ambiente Wash Buffer 7.5 ml Tª ambiente Elution Buffer 5 ml Tª ambiente Normalisation plates 2 placas Tª ambiente Tabla 1. Componentes del kit imegen-Pancreatitis NGS Rev. 4. 07/02/2019 Página 7 de 16...

  • Página 8: Equipos, Reactivos Y Materiales Necesarios Que No Se Suministran

    Nota: Este kit no incluye los reactivos necesarios para llevar a cabo la secuenciación por NGS Kits complementarios Imegen-Pancreatitis NGS está preparado para usarse en combinación con los kits imegen- Sample tracking A y B (REF: IMG-234 y IMG-311), que permiten el seguimiento de cada muestra desde la dilución del ADN hasta el análisis bioinformático de los resultados mediante...

  • Página 9: Protocolo De Ensayo

    Pancreatitis Master Mix, agitar en vortex y centrifugar este mix de PCR. 3. Imegen recomienda incluir un control negativo (CPCR) en cada ensayo de secuenciación para verificar la ausencia de contaminación. Para ello, dispensar en una placa de 96 pocillos, 17.5 µL del mix de PCR al pocillo del control de PCR (CPCR) y añadirle 5 µL de...
  • Página 10 Sample tracking B Kit, REF. IMG-311) a cada muestra de ADN. Añadir la cantidad de ADN diluido a 10 ng/µL recomendada en el paso anterior (Sección 6.14) junto con el reactivo de seguimiento correspondiente a cada uno de los mixes. 5.

  • Página 11: Normalización De Los Productos De Pcr

    6.2 Normalización de los productos de PCR Una vez han finalizado las reacciones de amplificación se deben purificar los productos. El método de purificación, además permite normalizar la concentración final de cada uno de los productos de PCR de acuerdo con el siguiente protocolo. Nota: Ya que de ahora en adelante se va a tratar con amplificados de PCR, es aconsejable continuar con el protocolo en una zona post-PCR para evitar futuras contaminaciones.

  • Página 12: Preparación De Las Librerías

    MiSeq Reagents micro Kit v2 (300 ciclos). Ref: MS-103-1002 MiSeq Reagents Kit v2 (300 ciclos). Ref: MS-102-2002 Tabla 3. Máximo número de muestras de imegen-Pancreatitis NGS analizadas en MiSeq Illumina (Ciclos: 2 x 150 bp). Opción 2 Usted no tiene suficientes muestras para rentabilizar una carrera de NGS o no dispone de un equipo de secuenciación masiva y quiere remitirnos las muestras.

  • Página 13: Secuenciación Ngs De Las Librerías

    8. Secuenciación NGS de las librerías Una vez realizados los protocolos descritos en la sección 6 de Protocolo de ensayo, las muestras están totalmente preparadas para ser remitidas a nuestro servicio de secuenciación NGS. En este servicio a partir de la muestra recibida se comprobará la calidad y concentración del ADN y se prepararán las librerías para realizar la secuenciación.

  • Página 14: Análisis De Los Resultados

    El análisis bioinformático está disponible para las muestras que hayan sido secuenciadas in-situ por el usuario del producto, así como las librerías que se hayan preparado y secuenciado en imegen. En este caso escriba a info@imegen.es y se le habilitará una cuenta FTP mediante la cual, se compartirán los ficheros resultantes de la secuenciación.

  • Página 15: Troubleshooting

    10. Troubleshooting A continuación, se enumeran los posibles resultados no esperados a lo largo del protocolo de amplificación y normalización de las dianas analizadas con imegen-Pancreatitis NGS. ▪ Ausencia de amplificados en la muestra: o Cantidad de ADN molde no óptima, ya sea por exceso o por escasez. En este caso es recomendable comprobar que la concentración de la muestra es la...

  • Página 16: Limitaciones

    11.2 Reactivos Imegen-Pancreatitis NGS se ha validado empleando los reactivos incluidos en el kit y los recomendados en el apartado 5 de este manual (Equipos y materiales necesarios que no se suministran).

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