Normalización De Los Productos De Pcr - Imegen IMG-227 Instrucciones De Uso

6.2 Normalización de los productos de PCR
Una vez han finalizado las reacciones de amplificación se deben purificar los productos. El
método de purificación, además permite normalizar la concentración final de cada uno de los
productos de PCR de acuerdo con el siguiente protocolo.
Nota: Ya que de ahora en adelante se va a tratar con amplificados de PCR, es aconsejable
continuar con el protocolo en una zona post-PCR para evitar futuras contaminaciones.
Además, se recomienda limpiar las superficies de laboratorio con productos de
descontaminación de ADN.
1. Con la pipeta multicanal transferir 20 µL de cada producto de PCR a la placa de
normalización. Pipetear la solución en el fondo del pocillo.
2. Añadir 20 µL de Binding Buffer a cada pocillo. Agitar en vortex (10 segundos a 1200 rpm)
y centrifugar la placa de normalización.
3. Incubar 1 hora a temperatura ambiente.
4. Aspirar todo el líquido de los pocillos y descartarlo. Es muy importante, que se cambien
las puntas entre muestras para evitar posibles contaminaciones cruzadas.
5. Añadir 45 µL de Wash Buffer a cada pocillo de la placa de normalización.
6. En cada pocillo, pipetear arriba y abajo para facilitar la limpieza de contaminantes.
7. Aspirar completamente el líquido de los pocillos y descartarlo.
8. Invertir y golpear ligeramente la placa sobre papel absorbente para asegurar la
eliminación del líquido de los pocillos.
9. Añadir 20 µL de Elution Buffer a cada pocillo de la placa.
10. Agitar en vortex y spin a la placa.
11. Incubar 5 minutos a temperatura ambiente.
12. Pipetear todo el volumen de cada pocillo correspondiente a una misma muestra y
transferirlo a un tubo de 2 mL.
Es posible detener el protocolo en este punto.
Los productos normalizados pueden almacenarse a 4ºC si se va a continuar con el
protocolo en las próximas 24 horas o a -20ºC para periodos de tiempo superiores.
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