Tabla de contenido
Publicidad
Apéndice D
Análisis y purificación de oligonucleóti-
dos
Acerca de este capítulo
En este capítulo se describen los métodos empleados para el análisis y la purificación
de oligonucleótidos.
Análisis de intercambio de iones
El intercambio de iones se utiliza para analizar oligonucleótidos tanto fosfodiésteres
como fosforotioatos. Se trata de una técnica muy eficiente para detectar secuencias
fallidas muy pequeñas, incluso de nucleósidos y dinucleótidos simples. El nucleósido
simple suele eluirse como primer pico del cromatograma, junto al pico de paso directo,
y por lo general es muy pequeño. Los tamaños de pico superiores al 5 % son indicio de
algún problema durante el primer ciclo de la síntesis. Entre los problemas más habituales
se incluyen falta de purgado o de lavado de la columna, o presencia de humedad en
los reactivos.
Condiciones de análisis
recomendadas
Columna
Temperatura de
columna
Volumen de inyec-
ción
Caudal
Eluyente A
ÄKTA oligopilot plus Instrucciones de funcionamiento 28959748 AE
D Análisis y purificación de oligonucleótidos
Oligonucleótidos fosfodiés-
teres
NucleoPac PA 100 4x250 mm, DIONEX, n.º ref. 43010
+50 ºC
2 µL
1,0 mL/min
10 mM de Tris, 10 mM de
NaClO
4
Oligonucleótidos fosforotioatos
1 mM de EDTA, 25 mM de TRIS,
acetonitrilo 10 %, pH 8,0
189
Publicidad
Tabla de contenido
