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eluye 50 µl, deberá añadir por consiguiente 5 µl. La cantidad de Control interno
añadida depende exclusivamente del volumen de elución final. El Control interno
y el carrier de ARN (véase 8.1 Purificación del ADN) deben añadirse sólo
a la mezcla de tampón de lisis y muestra o
•
directamente al tampón de lisis.
•
El Control interno no debe añadirse directamente a la muestra. En caso de
añadirlo al tampón de lisis, tenga en cuenta que la mezcla del Control interno
y tampón de lisis/carrier de ARN debe prepararse y usarse inmediatamente
(el almacenamiento de la mezcla a temperatura ambiente o refrigerada puede
llevar después de unas horas, al deterioro del Control interno y a una
reducción de la eficiencia de la purificación). No añada el Control interno
directamente a la muestra.
El Control interno también puede utilizarse exclusivamente para el análisis de
una posible inhibición de la PCR (véase la Fig. 2). Para ello, añada por
reacción 2 µl del Control interno directamente a 30 µl de la Parvo B19
RG/TM Master. Utilice para cada reacción de la PCR 30 µl de la Master Mix
preparada y añada a continuación 20 µl de la muestra purificada. Si tiene que
preparar una PCR con más muestras, aumente las cantidades necesarias de la
Parvo B19 RG/TM Master y del Control interno de acuerdo al número de
muestras (véase 8.4 Preparación de la PCR).
8.3 Cuantificación
Los Estándares de cuantificación suministrados (Parvo B19 RG/TM QS 1 - 5) se
tratan como muestras ya purificadas y se añaden en el mismo volumen que
en el caso de las muestras (20 µl). Para elaborar una curva estándar en el
ABI PRISM Sequence Detection System, añada los cinco Estándares de
cuantificación suministrados, defínalos como estándares indicando
concentraciones correspondientes (véase 8.5 Programación del
ABI PRISM SDS). El software de los ABI PRISM 7000, 7700 y 7900HT
SDS no permite importar curvas estándar de experimentos anteriores.
12
artus Parvo B19 TM PCR Kit
*
las
03/2015
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