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Resumen de contenidos para Qiagen QIAamp 61904
- Página 1 Enero 2021 Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA ® Mini Kit (manual de uso) Versión 1 Para uso en diagnóstico in vitro 61904 QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, D-40724 Hilden Tel.: +49-2103-29-0 1122786ES Sample to Insight__...
- Página 2 Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit (manual de uso) 01/2021...
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Página 3: Tabla De Contenido
Contenido Uso previsto ....................... 5 Descripción y principio ....................6 Adsorción sobre la membrana QIAamp .............. 8 Eliminación de los contaminantes residuales ............8 Elución con Buffer AVE ..................8 Contaminación con ADN celular ................ 9 Volumen de las muestras ................... 9 Lisis ........................ - Página 4 Cuestiones importantes antes de comenzar ............22 Preparación de reactivos y tampones ..............24 Manipulación de las columnas de centrifugación QIAamp Mini ......27 Montaje del QIAvac 24 Plus vacuum manifold ..Error! Bookmark not defined. Centrifugación ....................31 Protocolo: Concentración de las muestras ............32 Protocolo: purificación de ARN vírico mediante una microcentrifugadora o los instrumentos QIAcube/QIAcube Connect MDx ..........
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Página 5: Uso Previsto
Uso previsto El QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit es un sistema que utiliza la tecnología de membrana de gel de sílice (tecnología QIAamp) para el aislamiento y la purificación del ARN vírico procedente de muestras biológicas. El producto está concebido para que lo utilicen usuarios profesionales, como técnicos y médicos formados en técnicas de biología molecular. -
Página 6: Descripción Y Principio
Descripción y principio El QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit refleja una tecnología bien consolidada para la preparación de ARN vírico. El kit combina las propiedades de unión selectiva de una membrana de gel de sílice con la velocidad de centrifugado o la tecnología de vacío. Asimismo, el kit es adecuado para el procesamiento simultáneo de varias muestras. - Página 7 Procedimiento Procedimiento de QIAamp DSP Viral vacío QIAamp DSP RNA Mini Spin Viral RNA Mini Spin Muestra Muestra Lisis Unión Vacío Lavado (Buffer AW1) Vacío Lavado (Buffer AW2) Vacío Elución Ácido nucleico vírico puro Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit (manual de uso) 01/2021...
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Página 8: Adsorción Sobre La Membrana Qiaamp
Adsorción sobre la membrana QIAamp Las condiciones de tamponado del lisado se deben ajustar para que las condiciones de unión sean óptimas para el ARN vírico antes de cargar la muestra en la columna de centrifugación QIAamp Mini. Debido al gran volumen del lisado, este deberá cargarse en la columna de centrifugación QIAamp Mini siguiendo varios pasos. -
Página 9: Contaminación Con Adn Celular
Contaminación con ADN celular El QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit no se ha diseñado para separar el ARN vírico del ADN celular y ambos se purificarán de forma paralela si están presentes en la muestra. Para evitar la purificación conjunta del ADN celular, se recomienda el uso de líquidos y secreciones corporales extracelulares para la preparación del ARN vírico. -
Página 10: Arn Transportador
ARN transportador El ARN transportador tiene dos funciones. En primer lugar, potencia la unión de los ácidos nucleicos víricos a la membrana de la columna de centrifugación QIAamp Mini, especialmente si en la muestra hay pocas moléculas diana. En segundo lugar, la adición de grandes cantidades de ARN transportador reduce las posibilidades de degradación del ARN vírico en el caso poco frecuente de que las moléculas de ARNasa no se desnaturalicen por efecto de las sales caótropas y del detergente de Buffer AVL. -
Página 11: Adición De Controles Internos
En el caso del protocolo de vacío, son necesarios el colector de vacío (QIAvac 24 Plus o uno equivalente; consulte la página 16) y una bomba que pueda producir un vacío de entre –800 y –900 mbar (por ejemplo, QIAGEN Vacuum Pump). -
Página 12: Purificación Automatizada De Arn Vírico En El Qiacube/Qiacube Connect Mdx
Al automatizar el QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit en el QIAcube o en el QIAcube Connect MDx, el instrumento quizá procese menos de 50 muestras debido a volúmenes muertos, evaporación y consumo adicional de reactivos por el pipeteado automatizado. QIAGEN únicamente garantiza 50 preparaciones de muestras con el uso manual del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit. - Página 13 Figura 1. El QIAcube. Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit (manual de uso) 01/2021...
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Página 14: Resumen Y Explicación
Figura 2. El instrumento QIAcube Connect MDx. Resumen y explicación El QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit proporciona el método para purificar el ARN vírico y utilizarlo de manera fiable en las tecnologías de amplificación. El ARN vírico se puede purificar a partir de plasma (tratado con anticoagulantes distintos a la heparina), suero y otros líquidos y secreciones corporales extracelulares. -
Página 15: Materiales Suministrados
‡ que estos procesen menos de 50 muestras debido a volúmenes muertos, evaporación y consumo adicional de reactivos por el pipeteado automatizado. QIAGEN únicamente garantiza 50 preparaciones de muestras con el uso manual del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit. -
Página 16: Materiales Necesarios Pero No Suministrados
Materiales necesarios pero no suministrados Siempre que trabaje con productos químicos, utilice una bata de laboratorio, guantes desechables y gafas de protección adecuados. Para obtener más información, consulte las hojas de datos sobre seguridad (Safety Data Sheets, SDS) correspondientes, que puede solicitar al proveedor del producto. - Página 17 Solo para el procedimiento automatizado Rotor Adapters, n.º de cat. 990394 Rotor Adapter Holder, n.º de cat. 990392 Sample Tubes CB (2 ml), n.º de cat. 990382 (tubo de entrada de la muestra) Shaker Rack Plugs, n.º de cat. 9017854 ...
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Página 18: Advertencias Y Precauciones
(Safety Data Sheets, SDS) correspondientes. Puede obtenerlas en línea en el práctico y compacto formato PDF en www.qiagen.com/safety, desde donde también podrá buscar, ver e imprimir las hojas de datos SDS de todos los kits y componentes de los kits QIAGEN. - Página 19 Si los frascos de tampones sufren algún daño o pierden líquido, use guantes y gafas de protección al desecharlos para evitar lesiones personales o lesiones a terceros. QIAGEN no ha analizado los residuos líquidos generados por los procedimientos QIAamp DSP Viral RNA Mini para determinar si contienen materiales residuales infecciosos. La contaminación del residuo líquido con materiales residuales infecciosos es muy improbable, pero no se puede...
- Página 20 Las siguientes instrucciones de prevención y riesgos son aplicables a los componentes del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit: Buffer AVL Contiene: tiocianato de guanidina. ¡Peligro! Nocivo en contacto con la piel y por inhalación. Puede ser nocivo por ingestión. Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares.
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Página 21: Almacenamiento Y Manipulación De Reactivos
Almacenamiento y manipulación de reactivos Las columnas de centrifugación QIAamp Mini se deben almacenar en seco a una temperatura de entre 2 °C y 8 °C; no se deben almacenar a mayores temperaturas. Todas las soluciones se deben almacenar a temperatura ambiente (15-25 °C), a menos que se indique lo contrario. Las columnas de centrifugación QIAamp Mini y todos los tampones y reactivos pueden almacenarse en estas condiciones hasta su fecha de caducidad en la caja del kit sin que presenten ninguna reducción en su rendimiento. -
Página 22: Manipulación Y Almacenamiento De Material De Muestra
blísteres o los frascos de tampones están dañados, póngase en contacto con el servicio técnico de QIAGEN o con su distribuidor local. Si se derrama algún líquido, consulte el apartado “Advertencias y precauciones” (página 18). No utilice los componentes dañados de un kit, ya que su rendimiento podría verse afectado. - Página 23 Use siempre guantes desechables y compruebe periódicamente que no se hayan contaminado con el material de las muestras. Deseche los guantes si se contaminan. Para minimizar la contaminación cruzada, no abra más de un tubo a la vez. No utilice componentes de kits distintos del que está...
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Página 24: Preparación De Reactivos Y Tampones
Preparación de reactivos y tampones Adición del ARN transportador al Buffer AVL* (solo para el procedimiento manual) Añada 310 μl de Buffer AVE al tubo con 310 μg de ARN transportador liofilizado para obtener una solución de 1 µg/µl. Disuelva bien el ARN transportador, repártalo en alícuotas del tamaño adecuado y guárdelas a una temperatura de –25 °C a –15 °C. - Página 25 La solución de Buffer AVL y ARN transportador debe prepararse nueva, y esta es estable a una temperatura de entre 2 °C y 8 °C hasta 48 horas. Esta solución crea un precipitado cuando se almacena a una temperatura de entre 2 °C y 8 °C, y se debe volver a disolver calentándola a una temperatura de 80 °C ±...
- Página 26 Buffer AW1* El Buffer AW1 se suministra como concentrado. Antes de usarlo por primera vez, añada la cantidad adecuada de etanol (96-100 %) según se indica en el frasco y en la Tabla 2. El Buffer AW1 es estable durante un periodo de 6 meses si se conserva cerrado y a temperatura ambiente, pero solo hasta la fecha de caducidad del kit.
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Página 27: Manipulación De Las Columnas De Centrifugación Qiaamp Mini
El QIAvac 24 Plus está diseñado para un procesamiento de vacío rápido y eficaz de hasta 24 columnas de centrifugación QIAGEN en paralelo. Las muestras y las soluciones de lavado se extraen a través de las membranas de la columna mediante vacío y no mediante centrifugación, lo cual proporciona mayor velocidad y menos tiempo de manipulación en los... - Página 28 Tenga siempre precaución y use gafas protectoras al trabajar cerca de un colector de vacío bajo presión. Póngase en contacto con el servicio técnico o con el distribuidor local de QIAGEN para obtener información sobre piezas de repuesto o de recambio.
- Página 29 Tabla 4. Propiedades de la resistencia química del QIAvac 24 Plus Resistente a: No resistente a: Ácido acético Sales caótropas Benceno Ácido crómico Alcoholes concentrados Fenol Cloruro sódico Cloroformo Tween Urea Tolueno ® Lejía con cloro Ácido clorhídrico Éteres Hidróxido de sodio –0,6 -0,4 Manómetro regular...
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Página 30: Montaje Del Colector De Vacío Qiavac 24 Plus
Montaje del colector de vacío QIAvac 24 Plus 1. Conecte el QIAvac 24 Plus a una fuente de vacío. Si utiliza el QIAvac Connecting System, conecte el sistema al colector y a la fuente de vacío tal como se describe en el Apéndice A del Manual de uso del QIAvac 24 Plus. -
Página 31: Centrifugación
Nota: Los tampones Buffer AVL y Buffer AW1 utilizados en el procedimiento QIAamp DSP Viral RNA Mini no son compatibles con los agentes desinfectantes que contienen lejía. Consulte la página 18 si desea obtener información de seguridad. Figura 4. Preparación del QIAvac 24 Plus con las columnas de centrifugación QIAamp Mini mediante el uso de VacValves y VacConnectors. -
Página 32: Protocolo: Concentración De Las Muestras
centrifugación a velocidades inferiores para la carga del lisado y el primer paso de lavado, siempre toda la solución se transfiera a través de la membrana. En el segundo paso de lavado, es muy recomendable la centrifugación a máxima velocidad. Todos los pasos de centrifugación deben realizarse a temperatura ambiente. -
Página 33: Protocolo: Purificación De Arn Vírico Mediante Una Microcentrifugadora O Los Instrumentos Qiacube/Qiacube Connect Mdx
Protocolo: purificación de ARN vírico mediante una microcentrifugadora o los instrumentos QIAcube/QIAcube Connect MDx Para la purificación de ARN vírico a partir de 140 µl de plasma, suero, orina, medio de cultivos celulares líquidos secreciones corporales extracelulares microcentrifugadora o de forma automatizada con los instrumentos QIAcube o QIAcube Connect MDx. - Página 34 Procedimiento Para efectuar el procedimiento manual con una microcentrifugadora, siga los pasos 1-11. Este procedimiento se puede automatizar en dos distintas versiones: Estándar: automatización completa con 140 µl de muestra (a partir del paso 1) Lisis manual: automatización parcial con lisis manual fuera del instrumento (empezando ...
- Página 35 Solo se debe utilizar etanol ya que el uso de otros alcoholes puede reducir el rendimiento y la pureza del ARN. No utilice alcohol desnaturalizado, que contiene otras sustancias como metanol o metiletilcetona. Si el volumen de la muestra es mayor a 140 µl, incremente la cantidad de etanol de manera proporcional (por ejemplo, una muestra de 280 µl requerirá...
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Página 36: Protocolo: Purificación Del Arn Vírico (Protocolo De Vacío)
10. Coloque la columna de centrifugación QIAamp Mini en un nuevo tubo de lavado (WT) de 2 ml y deseche el tubo de lavado que contiene el filtrado. Centrifugue a velocidad máxima durante 1 minuto. 11. Introduzca la columna de centrifugación QIAamp Mini en un tubo de elución limpio (ET). Elimine el tubo de lavado que contiene el filtrado. - Página 37 Para la elución en el paso 14, deje que el Buffer AVE se equilibre a temperatura ambiente. Asegúrese de que el Buffer AW1 y el Buffer AW2 se hayan preparado siguiendo las instrucciones que se indican en la página 26. Añada ARN transportador reconstituido en Buffer AVE al Buffer AVL según las instrucciones de ...
- Página 38 Solo se debe utilizar etanol, ya que el uso de otros alcoholes puede reducir el rendimiento y la pureza del ARN. No utilice alcohol desnaturalizado, que contiene otras sustancias como metanol o metiletilcetona. Para que la unión sea eficaz, es esencial que la muestra y el etanol se mezclen bien a fin de obtener una solución homogénea.
- Página 39 9. Dispense 750 μl de Buffer AW1 en la columna de centrifugación QIAamp Mini procurando no mojar el borde. Evite tocar la membrana de la columna de centrifugación QIAamp Mini con la punta de pipeta. 10. Abra la válvula principal de vacío. Una vez que el Buffer AW1 haya atravesado la columna de centrifugación QIAamp Mini, cierre la válvula principal de vacío y abra la válvula con tapón de rosca para ventilar el colector.
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Página 40: Control De Calidad
Control de calidad Conforme al sistema de gestión de la calidad con certificación ISO de QIAGEN, cada lote de los QIAamp DSP Viral RNA Mini Kits se someten a pruebas frente a una serie de especificaciones predeterminadas con el fin de garantizar una calidad constante del producto. -
Página 41: Símbolos
Símbolos En las instrucciones de uso o en el embalaje y en el etiquetado pueden aparecer los siguientes símbolos: Símbolo Definición del símbolo Contiene suficientes reactivos para <N> reacciones <N> Fecha de caducidad Producto sanitario para diagnóstico in vitro A su recepción Abrir a la entrega;... - Página 42 Símbolo Definición del símbolo Consultar las instrucciones de uso Anotar la fecha actual tras añadir etanol al frasco Etanol Contiene Liofilizado Reconstituir en → Conduce a Clorhidrato de guanidina Tiocianato de guanidina Número mundial de artículo comercial Número “R” es la revisión de las Instrucciones de uso y “n” es el número de revisión Mantener alejado de la luz solar Advertencia/precaución...
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Página 43: Información De Contacto
Para recibir asistencia técnica y solicitar más información, consulte nuestro centro de servicio técnico en el sitio www.qiagen.com/Support, llame al 800-362-7737 o póngase en contacto con uno de los departamentos de servicio técnico de QIAGEN o con los distribuidores locales (consulte la contraportada o visite www.qiagen.com). -
Página 44: Apéndice
Apéndice Manipulación del ARN Las ribonucleasas (ARNasas) son enzimas muy estables y activas que, en general, no requieren cofactores para actuar. Dado que las ARNasas son difíciles de inactivar y que se necesitan solamente cantidades minúsculas para destruir el ARN, no utilice ningún material de plástico ni de vidrio sin eliminar primero una posible contaminación con ARNasas. - Página 45 Material de plástico no desechable Los materiales plásticos no desechables se deben tratar antes de su uso para garantizar que no presentan ARNasas. Los materiales de plástico se deben lavar meticulosamente con 0,1 M de NaOH,* 1 mM de ácido etilendiaminotetraacético* (ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA) y enjuagar a continuación con agua sin ARNasas (consulte el apartado “Soluciones”...
- Página 46 Tanques de electroforesis Los tanques de electroforesis se deben limpiar con una solución de detergente (p. ej., dodecilsulfato sódico [sodium dodecyl sulfate, SDS] al 0,5 %)*, enjuagar con agua, secar con etanol* y llenar, a continuación, con una solución de H al 3 %.* Después de 10 minutos a temperatura ambiente, los tanques de electroforesis se deben enjuagar meticulosamente con agua sin ARNasas.
- Página 47 Añada 0,1 ml de dietilpirocarbonato (diethylpyrocarbonate, DEPC) a 100 ml de la solución tratará. Agite enérgicamente para disolver dietilpirocarbonato (diethylpyrocarbonate, DEPC) en la solución u hornéela durante 12 horas a 37 °C. Esterilice en autoclave durante 15 minutos para eliminar cualquier resto de dietilpirocarbonato (diethylpyrocarbonate, DEPC).
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Página 48: Información Para Pedidos
Información para pedidos Producto Contenido N.º de cat. QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit Para 50 preparados de ARN: 61904 (50) QIAamp Mini Spin Columns, ARN transportador, Collection Tubes (2 ml), tampones exentos de ARNasas Productos relacionados Instrumento y garantía de 1 año para QIAcube Connect MDx* 9003070 piezas y mano de obra... - Página 49 Para obtener información actualizada sobre licencias y exenciones de responsabilidad específicas del producto, consulte el manual de uso o la guía del usuario del kit de QIAGEN correspondiente. Los manuales de uso y las guías del usuario del kit de QIAGEN están disponibles en www.qiagen.com o pueden solicitarse al servicio técnico de QIAGEN o a su...
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Página 50: Historial De Revisiones Del Documento
Historial de revisiones del documento Revisión Descripción R6, 01/2021 Se han actualizado las siguientes secciones: “Purificación automatizada de ARN vírico en el QIAcube o el QIAcube Connect MDx”, “Materiales requeridos pero no suministrados”, “Advertencias y precauciones”, “Protocolo: purificación de ARN vírico mediante una microcentrifugadora o los instrumentos QIAcube/QIAcube Connect MDx”, “Símbolos”... - Página 51 Esta página se ha dejado en blanco intencionadamente. Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit (manual de uso) 01/2021...
- Página 52 Algunos de estos protocolos adicionales han sido proporcionados por usuarios de QIAGEN para usuarios de QIAGEN. QIAGEN no ha probado ni optimizado estos protocolos en profundidad. Por ello, QIAGEN no los garantiza ni asegura que no infrinjan los derechos de terceros.
- Página 53 Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit (manual de uso) 01/2021...
- Página 54 Pedidos www.qiagen.com/shop | Servicio técnico support.qiagen.com | Sitio web www.qiagen.com HB-0418-008 Instrucciones de uso del QIAamp DSP Viral RNA Mini Kit (manual de uso) 01/2021...