Exécution Du Test Pampa - Beckman Coulter Biomek FX-ADMETox Manual Del Usuario

Guide de mise en route rapide
Utilisation du logiciel PAMPA EVOLUTION96 et de la station de travail Biomek FX
Exécution du test PAMPA
1. Préparez la solution système avec différentes conditions de pH
a. Préparez 1 litre de solution système en ajoutant, à l'aide d'un verre gradué, 25 ml de
solution système concentrée à un total de 1 l d'eau distillée
b. Versez des aliquotes égales de solution système dans 3 flacons en verre propres
(environ 333 ml chacun).
c. Mesurez le pH initial de la solution système à l'aide d'un pH-mètre
d. Ajustez le pH à 7,4, 6,2 et 5,0 en ajoutant 0,5 M de NaOH, conformément au tableau
ci-dessous.
e. Vérifiez le pH de la solution système à l'aide d'un pH-mètre.
pH initial = 2,6
pH cible
5,0
6,2
7,4
f. Ajoutez 15 ml de solution système à pH ajusté dans chaque partition du réservoir
à 12 bacs de grande profondeur, conformément au tableau ci-dessous :
1 2
pH pH
7,4 7,4
2. Préparez la solution lipidique GIT.
a. Décongelez 2 ampoules en verre de solution lipidique GIT.
b. Cassez les ampoules à l'aide d'un brise-ampoule.
c. Videz la solution lipidique GIT dans la première colonne d'un réservoir à 12 bacs de
faible profondeur.
d. Transférez 18 µl de solution lipidique dans chaque puits du plateau pour lipides.
3. Préparez la solution système accepteur (ASB 7.4).
a. Placez 50 ml d'ASB 7.4 dans un réservoir de faible profondeur.
4. Préparez les composés de test
a. Pureté spectroscopique par DMSO pour la préparation des composés de test.
b. Ajoutez du DMSO aux composés de test conformément au tableau suivants :
16
pH initial = 2,8
NaOH (ml) pH cible
5,5 5,0
8,3 6,2
11 7,4
3 4 5 6
pH pH pH pH
7,4 7,4 6,2 6,2
.
.
pH initial = 3,0
NaOH (ml) pH cible
5
7,8
10,5
7 8 9
pH pH pH
6,2 6,2 5,0
Guides de mise en route rapide et de dépannage du Biomek FX/PAMPA Evolution96
.
.
NaOH (ml)
5,0 4,5
6,2 7,3
7,4 10,2
10 11 12
pH pH pH
5,0 5,0 5,0
REF A29703AB