Ejecución Del Ensayo Pampa - Beckman Coulter Biomek FX-ADMETox Manual Del Usuario

Guía de inicio rápido
Instrucciones para utilizar el software PAMPA EVOLUTION96 y la estación de trabajo Biomek FX
15. Seleccione Auto-refine (Refinar automáticamente). Los resultados del experimento
efectuarán un cálculo automático de los resultados.
16. Una vez finalizada esta acción, haga clic en el botón Ok (Aceptar).
Ejecución del ensayo PAMPA
1. Prepare la solución amortiguadora del sistema con condiciones de pH diferentes
a. Para preparar 1 litro de solución del sistema, añada 25 ml de concentrado de
solución de sistema en 1 l de agua destilada por medio de un cilindro graduado
b. Añada alícuotas iguales de solución del sistema en 3 botellas de vidrio limpias
(aproximadamente 333 ml en cada una).
c. Mida el pH inicial de la solución del sistema con un medidor de pH
d. Para ajustar los valores de pH a 7,4; 6,2 y 5,0, añada 0,5 m de NaOH de acuerdo con
la siguiente tabla.
e. Verifique el pH de la solución del sistema mediante un medidor de pH.
.pH inicial = 2,6
pH objetivo
5,0
6,2
7,4
f. Añada 15 ml de la solución del sistema con pH regulado a cada compartimento del
depósitos de perfil alto de 12 canalillos de acuerdo con la siguiente tabla:
1 2
pH pH
7,4 7,4
2. Prepare los lípidos de la GIT.
a. Descongele 2 ampolletas de vidrio de la solución de lípidos de GIT.
b. Para romper las ampolletas, utilice un cortador de ampolletas.
c. Vacíe los lípidos de GIT en la primera columna de un depósito de perfil bajo de 12
canalillos.
d. Transfiera 18 µl de lípidos a cada pocillo de la placa de lípidos.
3. Prepare la solución amortiguadora del sistema aceptor (ASB 7.4).
a. Coloque 50 ml de ASB 7.4 en un depósito de perfil bajo.
4. Prepare los compuestos del análisis
a. Para la preparación de los compuestos del análisis utilice DMSO de pureza
espectroscópica.
b. Para analizar los compuestos del análisis, añada DMSO de acuerdo con la siguiente tabla:
46
.pH inicial = 2,8
NaOH (ml) pH objetivo
5,5 5,0
8,3 6,2
11 7,4
3 4 5 6
pH pH pH pH
7,4 7,4 6,2 6,2
.
.pH inicial = 3,0
NaOH (ml) pH objetivo
5
7,8
10,5
7 8 9
pH pH pH
6,2 6,2 5,0
Guía de inicio rápido y de solución de problemas de Biomek FX/PAMPA Evolution96
.
.
.
NaOH (ml)
5,0 4,5
6,2 7,3
7,4 10,2
10 11 12
pH pH pH
5,0 5,0 5,0
PN A29703AB