Esecuzione Dell'aNalisi Pampa - Beckman Coulter Biomek FX-ADMETox Manual Del Usuario

Guida rapida
Utilizzo del software PAMPA EVOLUTION96 e della workstation Biomek FX.

Esecuzione dell'analisi PAMPA

1. Preparare il tampone di sistema con diverse condizioni di pH
a. Preparare 1 litro di soluzione di sistema aggiungendo 25 mL di concentrato di
soluzione di sistema e portare ad un totale di un 1 litro con acqua distillata usando
un cilindro graduato
b. Versare aliquote uguali di soluzione di sistema in 3 bottiglie di vetro pulite
(circa 333 mL ciascuna).
c. Misurare il pH iniziale della soluzione di sistema con un misuratore di pH
d. Regolare il pH a 7,4, 6,2 e 5,0 aggiungendo NaOH 0,5M come da seguente tabella.
e. Controllare il pH della soluzione di sistema con un misuratore di pH.
.pHstart =2,6
pHtarget
5,0
6,2
7,4
f. Aggiungere 15 mL della soluzione di sistema a pH regolato in ogni suddivisione del
serbatoio a 12 colonne ad alto profilo in base alla seguente tabella:
1 2
pH pH
7,4 7,4
2. Preparare la soluzione GIT-Lipid.
a. Scongelare 2 fiale di vetro contenenti la soluzione GIT-Lipid.
b. Rompere le fiale con un rompifialetta.
c. Versare la soluzione GIT-Lipid nella prima colonna del serbatoio a 12 colonne a
basso profilo.
d. Trasferire 18 µL di lipidi in ogni pozzetto della piastra dei lipidi.
3. Preparare il tampone del sistema di accettazione (ASB 7.4, Acceptor System Buffer).
a. Versare 50 mL di ASB 7.4 in un serbatoio a basso profilo.
4. Preparare i componenti del test
a. Dimetilsolfossido (DMSO) di purezza spettroscopica per la preparazione dei
componenti del test.
b. Aggiungere DMSO ai componenti del test in base alla seguente tabella:
26
.
.pHstart=2,8
NaOH (mL) pHtarget
5,5 5,0
8,3 6,2
11 7,4
3 4 5 6
pH pH pH pH
7,4 7,4 6,2 6,2
.
.
NaOH .pHstart=3,0
(mL) pHtarget
5 5,0
7,8 6,2
10,5 7,4
7 8 9 10
pH pH pH pH
6,2 6,2 5,0 5,0
Guide alla localizzazione dei guasti Biomek FX/PAMPA Evolution96
.
NaOH (mL)
4,5
7,3
10,2
11 12
pH pH
5,0 5,0
A29703AB