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Nota: Con Coomassie Blue
es posible detectar 1 g de
proteína en una sola banda.
Con las manchas de plata más
sensibles, es posible detectar
tan poco como 10 ng de
proteína.
•
p16
vierte la superposición y enjuagar la superficie del gel
varias veces con agua destilada.
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Prepare la solución de monómero de apilamiento de
gel, vierta el gel de apilamiento, e introducir un peine
(con un ligero ángulo) en el sándwich, teniendo cuidado
de no atrapar el aire debajo de los dientes. Permita un
mínimo de 1 hora para que el gel se polimeriza.
Preparación de la muestra y carga
La muestra puede ser cargado ya sea mientras
el sandwich está en la máquina de colada o
después de la cámara de amortiguación superior
está unido. Al cargar las muestras durante el
™
uso de placas divisorias, las muestras deben ser
cargados sin la cámara de amortiguación supe-
rior en su lugar.
La cantidad de muestra cargada depende del espe-
sor del gel, la sensibilidad del método de detección
utilizado, y la cantidad de muestra se espera en
cada banda. En un sistema tampón continuo, la
muestra de proteína debe ser relativamente con-
centrada, porque no se utiliza gel de apilamiento.
En un sistema de tampón discontinuo, la zona en
la que cada especie molecular migra se agudiza
por el gel de apilamiento, de modo que la muestra
no necesita ser tan concentrada.
1
Preparar los pozos
Quite el peine suavemente moviéndola de lado a lado
y luego levantándolo hacia arriba para evitar daños en
las paredes del pozo. Enjuagar cuidadosamente cada
pocillo con agua destilada para eliminar acrilamida
no polimerizada y luego drenar invirtiendo el empare-
dado de gel (o lanzador). Llene cada pocillo con el
tampón de electroforesis.
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