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No reutilice nunca las soluciones de lavado, ya que esto podría dar lugar a una acumulación del producto de
PCR eliminado, lo que podría interferir con los resultados de PapilloCheck
!
para cada ensayo.
La mezcla de solución de lavado preparada se puede almacenar durante un máximo de una semana a
temperatura ambiente. Compruebe si hay precipitados de dodecilsulfato de sodio. De haberlos, caliente la mezcla
de solución de lavado hasta que se disuelvan y equilíbrela de nuevo a temperatura ambiente. A continuación,
realice los preparativos para el siguiente experimento de hibridación.
8.3.2
Hibridación
La hibridación se debe llevar a cabo a temperatura ambiente entre 20 y 25 °C. Los principales pasos
de trabajo para la hibridación de los productos de PCR de la reacción PCR PapilloCheck
el microchip PapilloCheck
Mezcle los productos de la PCR antes de usarlos. Centrifúguelo brevemente.
!
Si los productos de la PCR se almacenaron a ≤ -20 °C hasta la hibridación, descongélelos antes de mezclarlos
y después continúe según lo descrito.
Mezcle el tampón de hibridación en el Vortex antes de usarlo. Centrifúguelo brevemente.
Transfiera 30 µl del tampón de hibridación PapilloCheck
una banda PCR con 8 tubos. Si resulta más cómodo, también se puede utilizar un pocillo nuevo
de una placa PCR.
Añada 5 µl del producto PCR al tampón de hibridación y mezcle mediante Vortex o pipeteando
arriba o abajo varias veces.
Centrifúguelo brevemente.
Transfiera 25 µl de la mezcla de hibridación a cada pocillo del microchip usando los seis canales
de una multipipeta. Evite la formación de burbujas de aire.
Se recomienda procesar seis muestras en paralelo usando una multipipeta de 8 canales y bandas
PCR con 8 tubos (consulte la Figura 5). Esto aumenta la eficiencia y velocidad de la manipulación, lo
que reduce el riesgo de evaporación. Si se va a procesar más de un portaobjetos al mismo tiempo,
es obligatorio usar una multipipeta para lograr el tiempo correcto de hibridación.
!
Evite la formación de burbujas de aire.
Si es posible, hibride los 12 pocillos del microchip. Si va a procesar menos de 12 muestras, deje
vacíos los pocillos sin usar. Los pocillos sin usar de un microchip procesado no se pueden usar
para muestras futuras.
!
Manipule el microchip con cuidado para no derramar la mezcla de hibridación. Los derrames pueden ocasionar
la contaminación cruzada de muestras y resultados falsamente positivos.
Incube el microchip durante exactamente 15 minutos a temperatura ambiente (20 y 25 °C) dentro
de la cámara de hibridación preparada en una atmósfera oscura y saturada de humedad. Tenga
cuidado de no mover la cámara de hibridación durante el proceso.
No cambie nunca el tiempo ni la temperatura de incubación de la reacción de hibridación, ya que podría causar
!
una pérdida de intensidad en la señal fluorescente o un aumento de la fluorescencia no específica.
No deje que los microchips hibridados entren en contacto directo con la luz del sol.
Manual de instrucciones de PapilloCheck
Revisión: BQ-708-00 / Octubre de 2017
se muestran en la Figura 5.
®
y PapilloCheck
high-risk
®
®
. Use soluciones de lavado nuevas
®
en un tubo de ensayo no utilizado de
®
PCR en
®
28
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