DRG EIA-2395 Instrucciones De Uso página 24

6.2 Eseguimento del test
Ogni analisi deve includere una curva standard.
1. Fissare i pozzetti necessari sul supporto.
2. Pipettare 15 µL di ogni Standard, Control e campione nei pozzetti, cambiando ogni volta la punta monouso.
3. Pipettare 100 µL Assay Buffer in ogni pozzetto.
Agitare bene per 10 secondi. È molto importante raggiungere un completo mescolamento.
4. Incubare per 120 minuti a temperatura ambiente.
5. Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti.
Lavare i pozzetti 3 volte con 300 µL Wash Solution diluita in ogni pozzetto. Rimuovere le gocce d'acqua rimanenti
rivoltando la piastra su carta assorbente.
Importante:
La sensibilità e la precisazione di questo kit sono fortemente influenzate dal corretto eseguimento del lavaggio!
6. Aggiungere 100 µL Antiserum ad ogni pozzetto.
7. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente.
8. Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti.
Lavare i pozzetti 3 volte con 300 µL Wash Solution diluita in ogni pozzetto. Rimuovere le gocce d'acqua rimanenti
rivoltando la piastra su carta assorbente.
9. Pipettare 100 µL Enzyme Complex in ogni pozzetto.
10. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente.
11. Rovesciare la piastra per vuotare i pozzetti.
Lavare i pozzetti 3 volte con 300 µL Wash Solution diluita in ogni pozzetto. Rimuovere le gocce d'acqua rimanenti
rivoltando la piastra su carta assorbente.
12. Aggiungere 100 µL della Substrate Solution ad ogni pozzetto.
13. Incubare per 15 minuti a temperatura ambiente.
14. Fermare la reazione enzimatica aggiungendo 50 µL della Stop Solution ad ogni pozzetto.
15. Determinare la densità ottica a 450 ± 10 nm con un fotometro per microtiter-piastre entro 10 minuti dopo l'aggiunta
della Stop Solution.
6.3 Rilevamento dei risultati
1. Determinare i valori medi della densità ottica per ogni set di standard, controlli e campioni.
2. Costruire una curva standard: riportare i valori medi della densità ottica (OD) di ogni standard contro la rispettiva
concentrazione dove i valori delle OD si devono trovare sull'asse verticale (Y) e le concentrazioni sull'asse
orizzontale (X).
3. Utilizzando il valore medio delle OD per ogni campione si determina la rispettiva concentrazione dalla curva standard.
4. Metodo automatico: I valori riportati in questo istruzioni per l'uso sono stati determinati tramite l'equazione a
4 parametri. (I methodi preferiti sono 4 Parameter Rodbard oppure 4 Parameter Marquardt.) Altri funzioni usati per
l'elaborazioni dei dati possono dare risultati leggermente differenti.
5. La concentrazione dei campioni può essere determinata direttamente dalla curva standard. Campioni con una
concentrazione più elevata dello standard più concentrato devono essere diluiti. Di questo fattore di diluizione deve
essere tenuto conto per il calcolo della concentrazione.
6.3.1 Esempio di una curva standard tipica
I seguenti dati sono a scopo dimostrativo soltanto e non possono sostituire i dati generati dall'eseguimento del test.
Version 10.0 2017/05 - vk
Leptin Sandwich ELISA EIA-2395
Standard
Standard 0 (0 ng/mL)
Standard 1 (2 ng/mL)
Standard 2 (5 ng/mL)
Standard 3 (25 ng/mL)
Standard 4 (50 ng /ml)
Standard 5 (100 ng/mL)
-
23 -
Densità ottiche (450 nm)
0,02
0,07
0,16
0,74
1,41
2,30