Cálculo De Los Resultados; Ejemplo De Una Curva Estándar Típica - DRG EIA-2395 Instrucciones De Uso

6.2 Procedimiento de ensayo
Cada uno debe incluir una curva de estándares.
1. Asegurar el número deseado de pocillos en el recipiente.
2. Dispensar 15 µL de cada Standard, Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados.
3. Dispensar 100 µL de Assay Buffer a cada pocillo.
Mezclar totalmente durante 10 segundos. Es importante mezclar completamente en este paso.
4. Incubar durante 120 minutes a temperatura ambiente.
5. Sacudir enérgicamente el contenido de los pocillos.
Lavar los pocillos 3 veces con 300 µL Wash Solution diluida por pocillo. Realizar un golpe seco de los pocillos
contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales.
Nota importante:
La sensibilidad y la precisión de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realización correcta del
proceso de lavado!
6. Dispensar 100 µL de Antiserum a cada pocillo.
7. Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente.
8. Sacudir enérgicamente el contenido de los pocillos.
Lavar los pocillos 3 veces con 300 µL Wash Solution diluida por pocillo. Realizar un golpe seco de los pocillos
contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales.
9. Dispensar 100 µL de Enzyme Complex a cada pocillo.
10. Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente.
11. Sacudir enérgicamente el contenido de los pocillos.
Lavar los pocillos 3 veces con 300 µL Wash Solution diluida por pocillo. Realizar un golpe seco de los pocillos
contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales.
12. Adicionar 100 µL de Substrate Solution a cada pocillo.
13. Incubar durante 15 a temperatura ambiente.
14. Parar la reacción enzimática mediante la adición de 50 µL de Stop Solution a cada pocillo.
15. Leer la OD a 450 ± 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos después de la adición de la Stop
Solution.
6.3 Cálculo de los Resultados
1. Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de estándares, controles y muestras de pacientes.
2. Construir una curva estándar mediante la representación de la absorbancia media obtenida para cada estándar
frente a su concentración con el valor de absorbancia en el eje vertical (Y) y la concentración en el eje horizontal (X).
3. Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentración correspondiente a partir de la
curva estándar.
4. Método automatizado: Los resultados en las instrucciones de uso se han calculado automáticamente usando una
curva de regresión 4 Parámetros. (4 Parámetros Rodbard o 4 Parámetros Marquardt son los métodos preferidos.)
Otras funciones de regresión darán lugar a resultados sensiblemente diferentes.
5. La concentración de las muestras puede leerse directamente de la curva de estándares. Las muestras con
concentraciones superiores al mayor estándar han de diluirse. Para el cálculo de las concentraciones hay que tener
en cuenta el factor de dilución.
6.3.1 Ejemplo de una Curva Estándar Típica
Los siguientes datos son solamente para la explicación y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el
momento del ensayo.
Version 10.0 2017/05 - vk
Leptin Sandwich ELISA EIA-2395
Estándar
Standard 0 (0 ng/mL)
Standard 1 (2 ng/mL)
Standard 2 (5 ng/mL)
Standard 3 (25 ng/mL)
Standard 4 (50 ng /ml)
Standard 5 (100 ng/mL)
-
30 -
Unidades Ópticas (450 nm)
0,02
0,07
0,16
0,74
1,41
2,30