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Printed For Final Review: 10/10/03
ECO Number: 27341
8.5 Pipettes :
a.
Micropipettes calibrées pour délivrer 100 µL, 200 µL et 500 µL.
b.
Distributeurs à répétition calibrés pour distribuer 200 µL et 500 µL.
8.6 Réfrigérateur entre 2 et 8° C ou bain de glace pilée.
8.7 Eau purifiée
9.
PROCÉDURE DE DOSAGE
9.1 Reconstituer les contrôles PTH-MM II de niveaux 1 et 2 et laisser les réactifs
liquides s'adapter à la température ambiante. Mélanger délicatement tous les
réactifs avant utilisation.
9.2 Installer des tubes en verre de 12 x 75 mm étiquetés en doublet selon le Profil
de dosage de la dernière page.
9.3 Ajouter les réactifs comme suit :
a.
Tubes de numération totale
Laisser de côté jusqu'à l'étape numéro 5.
b.
Liaison non spécifique (NSB)
100 µL d'étalon 0
c.
Étalon 0
100 µL d'étalon 0
200 µL d'antisérum PTH-MM II
d.
Étalons PTH-MM II (A-F)
100 µL d'étalon PTH-MM II
200 µL d'antisérum PTH-MM II
e.
Contrôle qualité et sérum inconnu
100 µL de sérum
200 µL d'antisérum PTH-MM II
9.4 Mélanger les tubes délicatement à l'aide du Vortex en évitant la formation de
mousse et mettre en incubation pendant 15 (±5) minutes entre 20 et 25° C.
9.5 Ajouter 200 µL de PTH-MM II
9.6 Mélanger les tubes délicatement à l'aide du Vortex en évitant la formation de
mousse et mettre en incubation pendant 2 heures (±15 minutes) entre 2 et 8°
C (réfrigérateur ou bain de glace pilée).
9.7 Mélanger vigoureusement le complexe précipitant DAG-PPT et en ajouter
500 µL dans tous les tubes à l'exception des tubes de numération totale.
9.8 Mélanger les tubes délicatement à l'aide du Vortex en évitant la formation de
mousse et mettre en incubation pendant 15 (±5) minutes entre 20 et 25° C.
9.9 Centrifuger les tubes pendant 20 minutes à un minimum de 760 x g* entre
20 et 25° C.
9.10 Décanter immédiatement le surnageant de tous les tubes, à l'exception des
tubes de numérotation totale, en les renversant pendant 2 minutes au
maximum. Placer les tubes sur du papier absorbant pour éliminer toutes les
gouttes de surnageant qui peuvent rester sur les bords avant de les replacer à
l'endroit.
9.11 Utiliser un compteur de scintillation gamma pour effectuer la numération du
précipité dans chaque tube et dans les tubes de numération totale pendant le
temps nécessaire à l'obtention d'une exactitude statistique (consulter les
sections Résultats et Limitations de la procédure).
10. COMMENTAIRES SUR LA PROCÉDURE
10.1 Ajouter chaque aliquote de réactif au tiers inférieur du tube à essai pour
garantir le mélange complet des réactifs.
10.2 Certains fabricants vendent des tubes jetables en verre borosilicaté qui
donnent des liaisons non spécifiques élevées.
* g = (1118 x 10
10:45 AM
I dans tous les tubes.
125
) (rayon en cm) (tr/min)
-8
2
15
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